一、p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用（论文文献综述）
李娇[1]（2020）在《自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控机制研究》文中研究表明目的:以小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为模型,研究自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控作用机制,为锰中毒职业人群的防治提供理论与实验依据。方法:1.TM3细胞分别暴露于MnCl2 0μM（空白对照组,C）、100μM（低剂量组,L）、200μM（中剂量组,M）、300μM（高剂量组,H）24 h。观察细胞形态,MTT比色法测定细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞内ROS（Reactive Oxygen Species）水平,TBA法检测细胞内丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量,WST-8法检测总超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性,总谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GPx）检测试剂盒测定总GPx活性,流式细胞仪检测Annexin V/PI双染后细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞内自噬,Western blot检测自噬相关蛋白p-Beclin1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Nrf2信号通路相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1及凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。2.TM3细胞在自噬激动剂雷帕霉素（Rapamycin,RAP,0.1μM）预处理2h后暴露300μM锰（RH组）24 h、细胞在自噬抑制剂siRNA-Beclin-1（40 nM）预处理5h并继续培养24h后暴露300μM锰（BH组）24 h。然后观察细胞形态,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,TBA法检测细胞内MDA含量,WST-8法检测总SOD活性,总GPx检测试剂盒测定总GPx活性,Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测自噬相关蛋白p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Nrf2信号通路相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1及凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。3.TM3细胞在Nrf2信号通路激动剂叔丁基对苯二酚（Tert-butylhydroquinone,TBHQ,10μM）预处理2 h后暴露300μM锰（TH组）24 h、TM3细胞在Nrf2信号通路抑制剂siRNA-Nrf2（40 nM）预处理5h并继续培养24 h后暴露300μM锰（NH组）24 h,然后观察细胞形态,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,TBA法检测细胞内MDA含量,WST-8法检测总SOD活性,总GPx检测试剂盒测定总GPx活性,Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测Nrf2信号通路相关蛋白HO-1、NQO-1、自噬相关蛋白p-Beclin1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ及凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。结果:1.与C组比较,锰以剂量依赖方式诱导TM3细胞活性下降及形态改变;M、H组与C组比较,ROS、MDA含量逐渐增加（P<0.05）而总SOD、总GPx活性逐渐下降（P<0.05）,凋亡率逐渐升高（P<0.05）,促凋亡相关蛋白Active caspase-3、Bax表达水平随锰浓度增加而升高（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则逐渐降低（P<0.05）;随着锰浓度增加,自噬溶酶体数量逐渐增多,M、H组p-Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/Ⅰ比例增加（P<0.05）,而p62蛋白表达水平较空白对照组呈先增加后降低趋势;与C组比较,Nrf2及其下游效应蛋白HO-1、NQO-1的表达在锰暴露后均呈先增加后降低趋势,而HO-1蛋白表达水平虽呈先增加后降低趋势,且各剂量锰暴露组的HO-1蛋白表达水平均比C组高（P<0.05）。2.与H组比较,RH组ROS含量呈减少趋势（P>0.05）,总SOD活力增加（P<0.05）;而BH组ROS、MDA含量均较H组呈增加趋势（P>0.05）,总SOD、总GPx活力较H组呈降低趋势（P>0.05）。与H组比较,RH组细胞凋亡率降低及Active caspase-3、Bax蛋白水平减少;而BH组Bax蛋白水平增加（P>0.05）,细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达较H组、RH组明显增加（P<0.05）。与H组比较,RH组HO-1蛋白表达水平升高,而BH组HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;Nrf2蛋白的表达在各实验组间无统计学意义（P>0.05）。3.与H组比较,TH组ROS含量明显降低（P<0.05）,总SOD活力明显增加（P<0.05）;NH组ROS、MDA含量较H组明显增加（P<0.05）,而总SOD、总GPx活力下降。流式细胞术检测细胞凋亡率发现,与H组比较,TH组细胞凋亡率降低,而NH组凋亡率较H组明显增加（P<0.05）。与H组比较,TH组Active caspase-3表达水平减少,Bcl-2表达水平明显增加（P<0.05）,而NH组Active caspase-3表达水平增加,Bcl-2表达水平虽增加,但差异无统计学意义（P>0.05）。与H组比较,TH组LC3Ⅱ/Ⅰ的比例减少（P>0.05）,p-Beclin1、p62蛋白表达水平增加（P>0.05）;而与H组比较,NH组p-Beclin1、p62蛋白表达水平均显着减少（P<0.05）。结论:1)锰致TM3细胞氧化损伤中激活自噬和Nrf2信号通路;2)在一定剂量下自噬在锰致TM3细胞氧化损伤中起保护作用;3)Nrf2信号通路在锰致TM3细胞氧化损伤中起保护作用;4)自噬和Nrf2信号通路在锰致TM3细胞氧化损伤中存在相互调控作用。
范希敏[2]（2017）在《锰对人群和SH-SY5Y细胞中PARK2表达的影响》文中指出目的:研究锰对人群和SH-SY5Y细胞中PARK2表达的影响。方法:⑴人群研究:选取铁冶炼厂的20名工人为对照组,锰铁合金冶炼厂的26名工人为锰暴露组。收集工人的血液和唾液,采用原子吸收分光光度法（atomic absorption spectrometry,AAS）测定锰和铁（iron,Fe）的浓度;实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PARK2 mRNA表达水平。⑵SH-SY5Y细胞实验:0、100、300、500μM浓度的MnCl2染毒SH-SY5Y细胞24小时后,用MTT法测细胞存活率（线粒体损伤）,AAS测定细胞内锰浓度,高度水溶性四唑盐（WST-1）法测定细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力,硫代巴比妥酸法（thibabituric acid,TBA）测定细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,反相高效液相（reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）-荧光法测定细胞内多巴胺（dopamine,DA）含量,RT-PCR检测PARK2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测Parkin蛋白表达水平。结果:⑴人群研究:与对照组比较,锰暴露组血浆、红细胞（red blood cell,RBC）、唾液和累积锰暴露的锰浓度分别高出2.2,2.0,1.7和3.0倍（P<0.05）,锰暴露组血液中PARK2 mRNA的表达降低42%（P<0.05）。相关性分析显示,PARK2mRNA的表达与血浆、RBC、唾液以及累积锰暴露的锰浓度呈负相关,r值分别为-0.526（P<0.05）、-0.317（P<0.05）、-0.652（P<0.05）、-0.737（P<0.05）。⑵SH-SY5Y细胞实验:与对照组比较,MnCl2浓度为300、500μM时,细胞存活率降低（P<0.05）。与对照组比较,染锰组细胞内锰浓度增高（P<0.05）。与对照组比较,MnCl2浓度为300、500μM时,SOD活力和DA含量降低（P<0.05）,MDA含量升高（P<0.05）;细胞PARK2 mRNA表达和Parkin蛋白表达降低（P<0.05）。相关性分析显示,PARK2 mRNA表达与线粒体损伤、细胞内锰含量、MDA含量呈负相关,r值分别为-0.902,（P<0.05）、-0.880（P<0.05）、-0.862（P<0.05）;PARK2 mRNA表达与SOD活力、DA含量、Parkin蛋白表达呈正相关,r值分别为0.879（P<0.05）、0.859（P<0.05）、0.809（P<0.05）。结论:1锰暴露工人血液中PARK2 mRNA表达下降,并与血浆、RBC、唾液以及累积锰暴露的锰浓度呈负相关。2锰暴露引起SH-SY5Y细胞线粒体损伤、氧化应激、DA分泌减少和PARK2表达下降。
王璐[3]（2014）在《烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和XIAP基因对新生大鼠耳蜗锰毒性保护作用的研究》文中认为目的：（1）通过构建锰（manganese, Mn）的耳毒性动物模型,观察氯化锰（manganese chloride, MnCl2）对离体培养的新生大鼠耳蜗组织的毒性作用及其剂量反应关系。（2）评估烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide, NAD）治疗Mn耳毒性的有效性,观察MnCl2所致的耳蜗细胞凋亡情况及NAD在抗细胞凋亡中的作用。（3）评估携带XIAP基因（X-linked inhibitor of apoptosis protein,凋亡抑制蛋白家族的成员之一）的改良型纳米羟基磷灰石载体复合物（PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP）治疗Mn耳毒性的安全性和有效性。方法：（1）采用出生后第3天的SASCO-SD大鼠作为本实验研究对象,处死后小心分离其耳蜗组织,培养过夜后,实验组以MnCl2浓度分别为0.5mM、1.0mM口3.0mM的培养液培养48h,对照组则以不含MnCl2的培养液培养。免疫荧光染色后于激光共聚焦倒置荧光显微镜下观察各组病理改变,并绘制耳蜗图。（2）采用上述大鼠,经解剖分离、培养过夜后,对照组以仅含0.5-3.0mM MnCl2的培养液处理,实验组以含0.5-30mM MnCl2和20mM NAD的培养液处理,空白对照组以不含MnCl2和NAD的培养液处理,均培养48h。免疫荧光染色后于激光共聚焦倒置荧光显微镜下观察各组病理改变,并绘制耳蜗图。对耳蜗基底膜单位长度内各组存活的听神经纤维（auditory nerve fiber, ANF）和耳蜗神经节单位体积内存活的螺旋神经节细胞（spiral ganglion neuron, SGN）进行计数和统计学分析。（3）采用上述大鼠,经解剖分离、培养过夜后,对照组以仅含1.0mM MnC12的培养液处理,实验组以含1.0mM MnCl2和20mM NAD的培养液处理,空白对照组以不含MnCl2和NAD的培养液处理,各组培养6h后用于caspase染色,培养9h后用于TUNEL染色。于激光共聚焦倒置荧光显微镜下观察各组TUNEL和caspase染色的情况。对单位体积内凋亡细胞标记阳性的SGN及存活的SGN进行计数和统计学分析。（4）采用化学共沉淀—水热合成法制备改良型纳米羟基磷灰石载体（PEG-PEI-nHAT）,并与治疗基因XIAP结合,制备纳米基因载体复合物PEG-PEI-nHAT-pEGFPNl-XIAP。对纳米基因载体复合物的安全性进行评估时,对照组以不含PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP的培养液处理,实验组以含500μ1浓度为1μg/μl的PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP的培养液处理；进行有效性评估时,对照组以仅含0.5～3.0mM MnCl2的培养液处理,实验组以含0.5-3.0mM MnCl2加500μ1浓度为1gg/μl的PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP的培养液处理,均培养48h。于激光共聚焦倒置荧光显微镜下观察各组SGN的存活情况,对单位体积内存活的SGN进行计数和统计学分析。结果：（1）对照组中耳蜗组织内、外毛细胞排列整齐有序,未见损伤或缺失,ANF由SGN发出,向毛细胞（hair cell, HC）呈放射状分布,排列平整,密集成束,SGN具有大而圆的胞体。MnCl2处理组（0.5-30mM MnCl2处理48h）中,随MnCl2浓度增高,HC、ANF和SGN的密度不断降低,HC的表皮板和静纤毛中的肌动蛋白也有所减少,ANF开始呈稀薄泡状,SGN胞体收缩碎裂,呈现凋亡细胞的特征。耳蜗图显示,随MnCl2浓度增高,HC缺失比例从20%逐渐升至70%。（2）NAD保护组（0.5-3.0mM MnCl2+20mM NAD处理48h）和MnCl2处理组（0.5-3.0mM MnCl2处理48h）相比,耳蜗组织的损伤得到了显着改善。在相应的MnCl：浓度下,加入20mM NAD后残存的ANF和SGN均有提高,由SGN辐射状向HC发出的ANF形态较完整,断裂成泡状的情况减少。同一MnCl2浓度下,NAD保护组中存活的ANF和SGN数均高于MnCl2处理组,差异有统计学意义（p<0.05）。（3）空白对照组中,TUNEL染色阳性的SGN不明显；MnCl2处理组（1.0mM MnCl2处理9h）中,TUNEL染色阳性的SGN频繁可见；NAD保护组（1.0mM MnCl2+20mM NAD处理9h）中,TUNEL染色阳性的SGN相对于MnCl2处理组有所减少。MnCl2处理组（1.0mM MnCl2处理6h）中,较多的SGN被活化的caspase-3,-8,-9探针标记,尤其是胞体固缩、变形的SGN；NAD保护组（1.0mMMnCl2+20mM NAD处理6h）中,被活化的caspase-3,-8,-9探针标记的SGN明显少于MnCl2处理组。NAD保护组和MnCl2处理组中TUNEL和caspase染色呈阳性的细胞的比例差异均有统计学意义（p<0.05）。（4）纳米基因载体复合物的安全性评价中,对照组中正常的SGN数量多,其胞体大而圆；实验组（500μl PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP处理48h）中SGN无明显的固缩和破碎,胞体大而圆,XIAP基因的绿色荧光蛋白在SGN及周围细胞内有表达而呈绿色荧光；两组存活的SGN计数无统计学差异（p>0.05）。有效性评价中,随着MnCl2浓度上升,对照组（0.5-3.0mM MnCl2处理48h）中多数SGN胞体破碎、细胞核固缩、细胞严重缺失；实验组中（0.5-3.0mM MnCl2+500μl PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP处理48h）,随着MnCl2浓度上升,SGN仍不可避免出现核固缩、破碎和细胞缺失,但严重程度低于对照组,且XIAP基因中的绿色荧光蛋白在SGN及周围细胞内有表达而呈绿色荧光；同一浓度下,实验组中存活的SGN数均高于对照组,差异有统计学意义（p<0.05）。提示XIAP基因对锰中毒导致的耳毒性损伤可能具有保护作用。结论：（1）Mn可引起SD大鼠耳蜗HC.ANF和SGN的病理损伤,毒性作用呈量效关系,病理损害程度随Mn浓度增加而增大。（2）NAD可减轻Mn对SD大鼠耳蜗ANF和SGN的损伤作用,在低浓度Mn条件下,NAD可减轻Mn对SD大鼠耳蜗HC的损伤作用。（3）Mn耳蜗毒性的病理生理学机制与caspase-3,-8,-9的活化、DNA碎裂以及细胞凋亡有关,NAD可抑制Mn诱导的caspase活化、DNA碎裂和细胞凋亡。（4）纳米基因载体复合物PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP对耳蜗SGN无明显急性毒性作用,XIAP基因对Mn所致的耳蜗SGN损伤可能具有保护作用。图22幅,表9个,参考文献182篇。
张丽琳[4]（2012）在《酿酒酵母应对镉胁迫的分子机理研究》文中指出镉离子(Cd2+)作为人体的非必需金属离子，具有致癌性，对人类健康造成严重威胁，但其作用靶点及毒性机理尚不完全明确。本文在实验室前期工作的基础上，对112个对Cd2+敏感的酿酒酵母基因缺失株进行了初步的系统研究。发现其中81个基因缺失株对必需金属离子Mn2+, Zn2+或Fe2+的胁迫也敏感，而其它31个基因缺失株对Cd2+胁迫具有专一性。这些基因的功能主要集中在蛋白修饰、转录、信号传导和细胞运输等方面。通过倍比稀释表型分析和蛋白印迹检测发现，两个MAP Kinase信号传导途径，细胞壁完整性途径（CWI）和高渗透压途径（HOG），参与Cd2+胁迫的细胞应答。HOG途径中Sho1和Sln1分支都参与了Cd2+胁迫下Hog1p的激活。在CWI途径中，Cd2+激活Slt2p是通过膜感受器Mid2p将信号通过GEFs-Rom1p传递到Rho1，进而激活PKC途径中的MAP Kinase.此外，Slt2p的激活还依赖TOR途径中的Sit4，但与HOG途径无关。酵母细胞在Cd2+胁迫下Hog1p和Slt2p的激活与细胞内钙离子浓度变化无关。但是，Cd2+胁迫不导致Hog1和Slt2细胞内的移位。此外，培养基中加入Mn2+或Fe2+都可以抑制hog1Δ和slt2Δ对Cd2+的敏感性，表明Mn2+或Fe2+的缺陷导致细胞对Cd2+的敏感性。而Mn2+通道蛋白Smf1&Smf2和Fe2+通道蛋白Fet4缺失导致细胞对Cd2+的耐受性，说明Cd2+可能借助Mn2+通道和Fe2+通道进入细胞。Hog1和Slt2正向调控SMF1, SMF2和PCA1基因的转录。与细胞运输相关的VPS家族基因中有29个基因缺失后对Cd2+表现出生长缺陷，其中包括9个与蛋白降解相关的VPS Class E家族基因。文献报道锌通道Zrt1介导Cd2+进入细胞，但zrt1菌株在Cd2+胁迫下的表型与野生型一致。ZRT1/2与VPS Class E的双基因缺失菌株对Cd2+的表型与VPS Class E基因单独缺失时一致。蛋白印迹检测发现Cd2+胁迫下Zrt1p的降解方式与Zn2+胁迫一致，需要VPSClass E的参与。
高利民,冯义朝,王恬,王建馗[5]（2010）在《肝性脑病发病机制的研究进展》文中研究说明肝性脑病（HE）是以各种严重肝脏疾病所致的代谢紊乱为基础的中枢神经系统（CNS）功能失调综合征,以神经精神症状为主,临床表现为意识障碍、行为异常、昏迷,可有扑翼样震颤和构音障碍,出现病理反射、血氨升高、特征性脑电图异常（高幅慢波）,HE的这些异常临床表现的程度和范围很广。目前存在的学说主要有:经典的氨中毒、锰离子、假性神经递质、γ-氨基丁酸、血浆氨基酸失衡学说等,其中氨中毒学说仍占中心地位,降低血氨依然是治疗HE的主要措施之一。此文将近年有关HE发病机制的研究进展作一综述。
郑安,牛丕业[6]（2009）在《锰对神经细胞凋亡的影响》文中研究说明
程月发[7]（2009）在《葛根素通过细胞凋亡途径干预帕金森病模型的研究》文中研究说明帕金森病（Parkinson’s Disease,PD）是一种中老年人常见的以黑质纹状体区多巴胺能神经元进行性缺失和纹状体多巴胺含量显着减少为特征的中枢神经系统退行性疾病。在神经退行性疾病中,其发病率和危害程度仅次于阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease）。葛根素是传统中药葛根中的活性成分,目前研究表明葛根素具有扩张血管、降血脂和降低血压、改善微循环、抗氧化、抗血栓形成,修复内皮细胞损伤以及抑制神经细胞凋亡等药理作用。国内葛根素临床上已经广泛应用于心脑血管疾病的预防和治疗,同时临床上也有用葛根素治疗PD,效果良好。文献报道葛根素具有清除氧自由基的作用,并能预防性对抗各种氧化剂引起的氧化性损伤。另有学者报道,葛根素作为一种异黄酮类化合物,可以明显减弱MPP+诱导的中脑多巴胺神经元细胞氧化损伤。氧化性损伤可以导致神经元细胞发生凋亡,目前认为细胞凋亡是帕金森病的重要病因病机。葛根素能否通过干预细胞凋亡的途径而达到保护神经元,从而影响帕金森病的发生发展是本课题的研究目的,通过本课题的研究期望能够为葛根素的应用提供一定的理论依据。1目的通过建立的PD体外细胞模型和动物体内模型探讨葛根素在PD发病中的作用。实验采用MPP+处理SH-SY5Y细胞建立PD的体外模型,考察葛根素在MPP+诱导SH-SY5Y细胞的凋亡过程中的作用;通过给予6-OHDA单侧注射损毁黑质神经元建立PD大鼠模型,研究葛根素对PD模型大鼠的影响,进一步探讨葛根素的作用机制。2方法2.1台盼蓝染色法检测细胞存活率和形态学观察葛根素预处理后培养的SH-SY5Y细胞和1mM MPP+作用48 h后台盼蓝检测。后续实验中分组如下:空白对照组、模型组（1mM MPP+组）和不同浓度的葛根素药物组（12.5μM puerarin+1mM MPP+组,25μM puerarin+1mM MPP+组,50μM puerarin+1mM MPP+组）。2.2 JC-1流式细胞检测线粒体膜电位葛根素造模24h后进行JC-1染色,流式细胞仪分析。2.3 ELISA检测胞浆细胞色素C的含量各组细胞培养24小时,达到密度为2x106 cells/ml。ELISA试剂盒检测细胞色素C的含量,Bradford法检测蛋白的浓度。2.4 Western blotting检测Cyt c蛋白的表达细胞造模24小时后进行胞浆蛋白的提取和定量,SDS垂直电泳,获得凝胶;含样品的凝胶进行电转移后开展免疫学实验,免疫学:封闭PVDF膜l h后,加入Cyt c单克隆抗体,常规加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG（二抗）, ECL检测试剂与膜作用暗室中曝光,X线显影、定影。凝胶成像系统进行分析。2.5流式细胞术检测细胞凋亡率各组细胞造模48 h后,按照试剂盒说明书,进行染色,流式细胞仪检测细胞周期和细胞的凋亡率。2.6 Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9酶活性的检测按试剂盒说明完成。各组细胞造模24小时后,细胞密度为2x106 cells/ml。离心收集细胞后冰浴裂解。设置反应体系,加入Ac- DEVD -pNA（2mM）后37℃孵育60-120分钟。颜色变化比较明显时即可测定A405。蛋白浓度测定Bradford法检测。Caspase-8酶活性的检测:方法同上,反应体系的特异性底物为Ac- IETD–pNA。Caspase-9酶活性的检测:方法同上,反应体系的特异性底物为Ac-LEHD–pNA。2.7 DNA Ladder检测细胞加药处理48 h后,裂解细胞、提取基因、灭活核酸酶,消化蛋白质和RNA,选择性分离基因组DNA与凋亡DNA ladder,琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像系统拍摄。2.8动物实验6-OHDA立体定位注射手术造模成功的大鼠分为A组（空白对照组）、B组（假手术对照组）、C组（6-OHDA模型组）;D组(（6-OHDA模型+低剂量葛根素处理组）和E组（6-OHDA模型+高剂量葛根素预处理组）。低剂量葛根素为40mg?Kg-1/day葛根素腹腔注射,高剂量为120mg?Kg-1/day葛根素腹腔注射。连续10天。在6-OHDA注射术后的第34天,每组取2只用于透射电镜观察。其余按常规灌注、取脑、固定,制作蜡块和中脑黑质、纹状体切片,用于检测黑质区的HE,TH-IHC,TH-ISHH,Tunel,Bcl-2,Bax,和纹状体的GDNF表达实验。实验操作按常规办法进行。采用形态学显微图像分析系统进行半定量分析。2.9数据统计细胞学各组实验均设置复孔并重复3次。数据采用均值±标准差（x±s）,检验方法:组间均数比较检验采用t检验;多组间均数比较检验采用单因素方差分析。采用SPSS11.0统计分析软件,p<0.05为有显着差异,p<0.01为有非常显着差异。3结果3.1葛根素预处理后MPP+作用SH-SY5Y细胞的活性MPP+作用的SH-SY5Y细胞活性随着MPP+浓度增加显着降低,当MPP+剂量达到1mM以上时,与对照组比较,细胞活性相对为56%（p<0.05）。经葛根素预处理的细胞活性与单纯MPP+处理的细胞活性有显着性差异（p<0.01）;说明葛根素能够提高MPP+处理的SH-SY5Y细胞存活率。用葛根素预处理后的细胞,对MPP+的毒性具有较强的保护作用,能够提高细胞的成活率。3.2线粒体跨膜电位JC-1和Cyt c检测结果JC-1染色流式细胞仪检测细胞的结果表明,单纯MPP+处理的SH-SY5Y细胞,线粒体膜电位显着下降,而加葛根素预处理的细胞,线粒体膜电位下降较低。ELISA检测结果显示, 1mM MPP+作用于SH-SY5Y细胞24h后,能显着增加细胞色素C的释放（p<0.05）,葛根素的预保护能够抑制细胞色素C的释放（p<0.05）。Western blotting检测结果与ELISA结果一致。提示MPP+是通过降低细胞线粒体跨膜电位来破坏线粒体通透性,增加Cyt c的释放,诱导SH-SY5Y细胞的凋亡,而葛根素能够阻断线粒体跨膜电位的下降,维持线粒体膜的通透性,抑制Cyt c的释放,从而发挥保护细胞的作用3.3细胞凋亡检测结果流式细胞术检测结果表明单纯MPP+处理的细胞,凋亡率显着升高（p<0.05）;加葛根素处理后比单纯MPP+处理的细胞,凋亡率明显降低（p<0.05）;DNA ladder的电泳结果显示1mM MPP+作用于SH-SY5Y细胞48h后有明显的DNA梯带形成,而正常组细胞与葛根素加药组并不明显。进一步说明葛根素具有减少MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡作用。3.4 Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9酶活性检测结果药物处理细胞24h后,Caspae-3和Caspase-9的活性在对照组最低,单纯MPP+处理最高,有统计学差异（p<0.01）。而不同剂量的葛根素均能够影响其活性表达,随着葛根素剂量的加大,Caspae-3和Caspase-9酶活性显着降低（p<0.05）。Caspase-8的活性在各组间没有明显差异。结果提示Caspase-3和Caspase-9参与了线粒体膜电位下降和Cyt c释放后的凋亡过程,而Caspase-8的变化不大,也可能提示葛根素保护MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡主要是通过线粒体凋亡途径起作用的,至于在受体死亡途径的作用,尚需要进一步研究。3.5透射电镜观察空白对照组和假手术组黑质部位,神经元形态正常。6-OHDA手术组出现了大量神经元细胞凋亡,特征明显。高、低剂量葛根素治疗组黑质神经元细胞表现为轻度凋亡。3.6 HE组织病理学结果正常对照组和假手术组,黑质区组织细胞正常。单纯6-OHDA注射组,损毁侧黑质区结构排列紊乱,出现凋亡特征。葛根素注射组,也存在凋亡,但程度明显轻。3.7 TH-IHC,TH-ISHH ,Tunel,Bcl-2,Bax,GDNF表达结果TH-IHC,TH-ISHH ,Tunel的结果有同一性,即单纯注射了6-OHDA的损毁侧黑质神经元TH阳性表达少,Tunel凋亡细胞多,而葛根素处理的黑质部位明显好与单纯6-OHDA处理组,两者比较均有统计学差异。各组的Bcl-2表达较少,没有显着性差异。Bax蛋白在空白对照组和假手术组低表达;在6-OHDA注射组高表达,与空白对照组比较,有非常显着性差异（p<0.01）。葛根素注射组较单纯6-OHDA注射组Bax蛋白表达明显降低（p<0.05）。Bcl-2/Bax比率,单纯6-OHDA注射组和葛根素高、低剂量组的损毁侧明显偏低,与空白对照组比较均有非常显着差异（p<0.01）。3.8纹状体GDNF免疫组化结果单纯6-OHDA注射组损毁侧GDNF表达明显偏低,葛根素处理组与单纯6-OHDA注射组比较GDNF表达有显着差异（p<0.05）。4结论1.葛根素能够抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能是拮抗与线粒体凋亡途径相关的Caspase级联的激活。即:通过维持线粒体膜电位,降低线粒体膜的通透性,减少Cyt c向胞浆释放,抑制下游Caspase-9,Caspase-3的级联反应。2.葛根素可以明显减轻6-OHDA对大鼠多巴胺能神经元的损害。与对照组比较,葛根素可以增加黑质部位TH阳性细胞的比例以及TH mRNA的表达百分率,减少细胞凋亡数量。对Bcl-2,Bax,GDNF的检测分析,Bcl-2蛋白变化不明显,但Bax蛋白表达的降低导致Bcl-2/Bax比值上升,出现凋亡抑制作用。葛根素能够提升GDNF的表达水平。
陈斯琦,黄国香,李莉,宋世震[8]（2008）在《黄芪对锰致PC12细胞凋亡的拮抗作用》文中进行了进一步梳理目的:研究黄芪对锰致多巴胺能神经元PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法:体外染锰培养多巴胺能神经元PC12细胞,MTT比色法观察染锰PC12细胞的增殖情况;流式细胞仪（FMC）和原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡状况及黄芪的拮抗作用。结果:锰对PC12细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量-反应关系;FMC和TUNEL检测结果均显示锰能诱导PC12细胞凋亡,并呈浓度依赖性,而加入黄芪后,各组凋亡率明显降低。结论:锰能够诱导PC12细胞凋亡,黄芪对锰诱导PC12细胞的凋亡有一定的拮抗作用。
王萍[9]（2008）在《氯化锰对PC12细胞凋亡的诱导作用及机制研究》文中研究表明目的以多巴胺能神经元PC12细胞作为靶细胞,观察氯化锰作用后,对细胞增殖及凋亡的影响,并检测其凋亡相关基因Hsp70、Survivin、Bcl-2和Bax表达情况,以探讨氯化锰致PC12细胞凋亡作用的分子机理。方法体外培养PC12细胞,氯化锰作用后,显微镜下观察细胞的生长状态及形态学变化;MTT比色试验检测PC12细胞的增殖情况,筛选锰的毒作用剂量谱;流式细胞术（FCM）及DNA琼脂糖凝胶电泳检测PC12细胞凋亡;免疫细胞化学法检测PC12细胞Hsp70、Survivin、Bcl-2和Bax蛋白表达情况及定位。结果氯化锰处理24 h后PC12细胞形态明显改变。氯化锰能抑制PC12细胞的增殖,呈时间-剂量效应关系,400 umol/L氯化锰作用48小时,PC12细胞的增殖抑制率为58.4%。氯化锰能诱导PC12细胞凋亡,流式细胞术（FCM）显示氯化锰诱导PC12细胞凋亡呈剂量依赖性,各染毒组与对照组比较差异有显着性（P<0.01）;DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA Ladder。氯化锰作用后,细胞Bax蛋白的表达呈剂量依赖性增强,且与PC12细胞凋亡之间呈正相关关系（R1= 0.972,P<0.01）;细胞Hsp70、Survivin、Bcl-2蛋白的表达呈剂量依赖性下调,且与PC12细胞凋亡之间呈负相关关系（R2=-0.990, R3=-0.976,R4=-0.980,P均<0.01）。结论氯化锰作用于PC12细胞一定时间后,能明显抑制其增殖,并呈时间-剂量效应关系;氯化锰作用于PC12细胞24h后,能诱导其发生凋亡,并呈剂量依赖性;在氯化锰的作用下,PC12细胞中Bax蛋白的表达呈剂量依赖性增高,且与PC12细胞凋亡有正相关关系;Hsp70、Survivin、Bcl-2蛋白的表达呈剂量依赖性降低,且与PC12细胞凋亡有负相关关系。所以,氯化锰诱导PC12细胞发生凋亡可能是多个凋亡调控基因共同参与的结果:可能是通过上调促凋亡基因Bax,下调凋亡抑制基因Bcl-2、Hsp70和Survivin的表达而引发细胞内发生一系列反应最终导致PC12细胞凋亡。
李玲玲,李朝飞,庞义[10]（2007）在《杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备》文中研究说明用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV）p35基因,将其克隆至质粒pET-32a（+）上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。
二、p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用（论文提纲范文）
（1）自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 锰致TM3细胞氧化损伤作用激活自噬和Nrf2信号通路 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 自噬/Nrf2信号通路在锰致TM3细胞氧化损伤中的相互调控机制研究 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）锰对人群和SH-SY5Y细胞中PARK2表达的影响（论文提纲范文）
| 中英缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 职业性锰暴露对工人PARK2表达的影响 |
| 前言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 锰对SH-SY5Y细胞线粒体损伤、氧化应激、多巴胺分泌及PARK2表达的影响 |
| 前言 |
| 材料 |
| 实验方法 |
| 统计学方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和XIAP基因对新生大鼠耳蜗锰毒性保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 符号说明 |
| 1 锰耳毒性动物模型的构建 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 试剂与实验仪器 |
| 1.2.3 试剂配制 |
| 1.2.4 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 锰对耳蜗组织的损伤作用 |
| 1.3.2 不同浓度锰对耳蜗组织的损伤作用 |
| 1.3.3 耳蜗图 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 2 NAD对锰耳毒性的保护作用及其机制 |
| 2.1 前言 |
| 2.1.1 NAD与疾病 |
| 2.1.2 细胞凋亡标志 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 试剂与实验仪器 |
| 2.2.3 试剂配制 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.2.5 统计学方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 NAD对锰耳毒性的保护作用 |
| 2.3.2 耳蜗图 |
| 2.3.3 NAD对听神经纤维的保护作用 |
| 2.3.4 NAD对螺旋神经节细胞的保护作用 |
| 2.3.5 TUNEL染色 |
| 2.3.6 活性caspase-3,-8,-9标记 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 NAD对锰耳毒性的保护作用 |
| 2.4.2 锰的耳毒性机制 |
| 2.5 小结 |
| 3 XIAP基因对锰耳毒性的保护作用 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 试剂与实验仪器 |
| 3.2.3 试剂配制 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.2.5 统计学方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组质粒pEGFPN1-XIAP的测序鉴定结果 |
| 3.3.2 PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP在螺旋神经节细胞中的安全性 |
| 3.3.3 PEG-PEI-nHAT-pEGFPN1-XIAP对锰耳毒性的保护作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述1 |
| 参考文献 |
| 综述2 |
| 参考文献 |
| 综述3 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果目录 |
| 致谢 |
（4）酿酒酵母应对镉胁迫的分子机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 镉的生物学特性 |
| 1.1.1 镉的理化性质 |
| 1.1.2 自然界中镉的分布及存在状态 |
| 1.1.3 镉的毒性 |
| 1.2 镉对信号传导途径的影响 |
| 1.2.1 镉对 MAPK 信号的影响 |
| 1.2.2 镉对其他信号通路的影响 |
| 1.3 镉离子的吸收以及细胞脱毒机制 |
| 1.3.1 镉离子的吸收系统 |
| 1.3.2 细胞对镉的脱毒机制 |
| 1.4 酿酒酵母 VPS 系统及其对重金属胁迫的应答 |
| 1.5 本课题研究的主要内容和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验仪器与材料 |
| 2.1.1 实验所用仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂、酶制剂及其他商品 |
| 2.1.3 实验所用试剂盒、DNA 及蛋白质样品 |
| 2.1.4 实验所用溶液及其配制 |
| 2.2 实验用菌株、质粒及引物 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 质粒构建 |
| 2.3.2 酵母转化 |
| 2.3.3 酵母基因组提取 |
| 2.3.4 倍比稀释表型分析 |
| 2.3.5 β-半乳糖苷酶活力测定 |
| 2.3.6 Western Blot |
| 2.3.7 原子吸收法测定细胞内离子浓度 |
| 第三章 酿酒酵母 HOG 途径和 CWI 途径对镉的应答机制 |
| 3.1 MAPKs-CWI-HOG 途径表型分析 |
| 3.2 镉胁迫下 HOG 途径对 Hog1p 的激活 |
| 3.2.1 Hog1p 磷酸化水平随镉处理时间和浓度变化 |
| 3.2.2 HOG 途径两条分支参与 Hog1p 的激活 |
| 3.2.3 镉胁迫下 Hog1p 的定位 |
| 3.3 镉胁迫下 CWI 途径中 Slt2p 的激活 |
| 3.3.1 Slt2p 磷酸化水平随镉处理时间变化 |
| 3.3.2 CWI 途径组分对 Slt2p 激活的影响 |
| 3.3.3 镉胁迫条件下 Slt2p 的定位于 |
| 3.4 其他信号传导途径对 Slt2p 激活的影响 |
| 3.4.1 TOR 途径对 Slt2p 激活的影响 |
| 3.4.2 镉胁迫下 Slt2p 的激活与 HOG 途径无关 |
| 3.4.3 镉胁迫下 Ca~(2+)对 MAPK 激活的影响 |
| 3.5 本章小结与讨论 |
| 3.5.1 小结 |
| 3.5.2 讨论 |
| 第四章 细胞膜通道蛋白在镉胁迫下的调控机制 |
| 4.1 通道蛋白缺失后的表型分析 |
| 4.2 通道蛋白缺失菌株内镉含量测定 |
| 4.3 通道蛋白与 HOG & CWI 途径的关系 |
| 4.3.1 双基因缺失株构建 |
| 4.3.2 双基因缺失菌株表型分析 |
| 4.3.3 Hog1p 和 Slt2p 对 SMF1 & SMF2 基因的转录调控 |
| 4.3.4 SMF1, SMF2 启动子区 SWI6/SMP1 结合位点的定点突变 |
| 4.3.5 Pca1p 与 HOG1 & SLT2 的关系 |
| 4.3.6 Fet4p 与 HOG1 & SLT2 的关系 |
| 4.4 本章小结与讨论 |
| 4.4.1 SMF1 的表达受 Hog1 和 Slt2 的调控，SMF2 主要由 Slt2 调控 |
| 4.4.2 FET4 与 Hog1 / Slt2 遗传互作 |
| 4.4.3 PCA1 的转录与 Hog1 / Slt2 有关 |
| 第五章 锌通道蛋白在镉胁迫下的降解机制 |
| 5.1 VPS Class E 与 ZRT1/ZRT2 双基因缺失菌株构建 |
| 5.2 VPS Class E 与 ZRT1/ZRT2 双基因缺失菌株表型分析 |
| 5.2.1 双基因缺失菌株对镉的表型分析 |
| 5.2.2 双基因缺失菌株对锌的表型分析 |
| 5.3 VPS Class E 基因缺失菌株中 ZRT1, ZRT2 转录和翻译后修饰 |
| 5.3.1 质粒构建 |
| 5.3.2 VPS Class E 基因缺失菌株中 ZRT1, ZRT2 转录水平分析 |
| 5.3.3 VPS Class E 基因缺失菌株中 Zrt1p, Zrt2p 的降解情况分析 |
| 5.4 Hog1p & Slt2p 对 ZRT1, ZRT2 转录水平的影响 |
| 5.5 本章小结与讨论 |
| 5.5.1 小结 |
| 5.5.2 讨论 |
| 第六章 镉离子敏感菌株对其它必需金属离子的敏感性 |
| 6.1 镉胁迫下酿酒酵母 BY4743 背景基因缺失菌株文库筛选 |
| 6.2 镉敏感性基因缺失菌株对必需金属 Mn, Zn, Fe 的表型分析 |
| 6.3 本章小结与讨论 |
| 6.3.1 小结 |
| 6.3.2 讨论 |
| 第七章 总结与展望 |
| 7.1 总结 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况 |
| 致谢 |
（6）锰对神经细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 1 锰对神经细胞线粒体的损伤机制 |
| 1.1 自由基损伤 |
| 1.2 锰改变脑组织线粒体顺乌头酸酶活力 |
| 1.3 锰诱导线粒体基因组突变 |
| 2 锰中毒导致溶酶体损伤机制 |
| 3 锰中毒导致基因表达的改变 |
| 3.1 p53和MDM2基因及其蛋白 |
| 3.2 NF-κB基因及其蛋白 |
| 3.3 Caspase家族及其蛋白 |
| 3.4 BNIP3基因 |
（7）葛根素通过细胞凋亡途径干预帕金森病模型的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 葛根素通过细胞凋亡途径干预帕金森病模型的研究 |
| 1 前言 |
| 研究一 葛根素对MPP~+诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡的保护作用 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 葛根素及其药液的配制 |
| 2.2 细胞株 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要溶液配制 |
| 2.5 主要仪器 |
| 2.6 细胞培养和传代 |
| 2.7 细胞冻存 |
| 2.8 细胞复苏 |
| 2.9 细胞计数方法 |
| 2.10 相差显微镜下观察培养的细胞形态 |
| 2.11 台盼蓝染色检测细胞活性 |
| 2.12 线粒体膜电位检测 |
| 2.13 ELISA 检测胞浆细胞色素C 的含量 |
| 2.14 Western blotting 检测胞浆Cyt C 的表达 |
| 2.15 Caspase-3，Caspase-8 和Caspase-9 酶活性的检测 |
| 2.16 流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞增殖周期 |
| 2.17 DNA ladder 检测细胞凋亡 |
| 2.18 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同剂量葛根素对 MPP~+诱导的 SH-SY5Y 细胞活性的影响 |
| 3.2 线粒体膜电位检测结果 |
| 3.3 细胞色素C 表达的变化 |
| 3.4 流式细胞术检测细胞凋亡率 |
| 3.5 DNA ladder 检测结果 |
| 3.6 Caspase-3，9，8 酶的活性变化 |
| 研究二 葛根素对6-OHDA 诱导的帕金森病大鼠模型的保护作用 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 主要实验设备 |
| 2.2 主要化学试剂 |
| 2.3 主要实验溶液的配制 |
| 2.4 动物造模 |
| 2.4.1 立体定位注射6-OHDA |
| 2.4.2 模型的行为学验证 |
| 2.4.3 第二次分组和处理办法 |
| 2.5 透射电镜观察 |
| 2.6 组织病理学、免疫组织化学和原位杂交实验 |
| 2.6.1 标本的留取和切片制备 |
| 2.6.2 黑质致密区HE 病理染色 |
| 2.6.3 黑质TH 免疫组化染色 |
| 2.6.4 黑质Bax 和Bcl-2 蛋白的免疫组化染色 |
| 2.6.5 黑质Tunel 细胞凋亡染色 |
| 2.6.6 黑质TH-ISHH 原位杂交组化染色 |
| 2.6.7 纹状体GDNF 免疫组化染色 |
| 2.7 图像处理和统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 行为学检测结果 |
| 3.2 组织学结果 |
| 3.2.1 电镜观察超微结构结果 |
| 3.2.2 HE 染色结果 |
| 3.2.3 黑质TH 免疫组化结果 |
| 3.2.4 黑质TH mRNA 原位杂交结果 |
| 3.2.5 黑质细胞Tunel 凋亡试验结果 |
| 3.2.6 黑质Bcl-2 和Bax 免疫组化结果 |
| 3.2.7 纹状体GDNF 免疫组化结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 PD 的发病机制 |
| 4.2 葛根素影响细胞凋亡的机制 |
| 4.3 细胞凋亡与PD |
| 4.3.1 线粒体是细胞凋亡的调节和控制中心 |
| 4.3.2 Caspase 家族，Bcl-2 家族与PD 相关的细胞凋亡 |
| 4.4 葛根素与PD 的关系 |
| 4.5 GDNF 与PD 细胞凋亡 |
| 4.6 结语和展望 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 1 本人简历 |
| 2 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
| 综述 植物雌激素通过泛素-蛋白酶体系统干预帕金森病的研究进展 |
（9）氯化锰对PC12细胞凋亡的诱导作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 PC12细胞培养 |
| 1.2 染毒PC12 细胞形态学观察 |
| 1.3 MTT法检测PC12 细胞生长活性 |
| 1.4 琼脂糖凝胶电泳检测凋亡DNA Ladder |
| 1.5 流式细胞术检测PC12 细胞凋亡率 |
| 1.6 免疫组化法检测PC12 细胞Hsp70、Survivin、Bcl-2 和Bax的表达 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 染毒PC12细胞形态学观察 |
| 2.2 染毒PC12细胞生长抑制率 |
| 2.3 染毒PC12 细胞DNA琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.4 PC12 细胞凋亡率（流式细胞术结果） |
| 2.5 PC12 细胞Hsp70、Survivin、Bcl-2 和Bax的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 昆虫、病毒、菌种、质粒和细胞 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 AcMNPV基因组DNA的提取 |
| 1.2.2 引物设计及PCR |
| 1.2.3 原核表达载体的构建 |
| 1.2.4 融合蛋白质的诱导表达 |
| 1.2.5 融合蛋白的纯化和抗体制备 |
| 1.2.6 免疫印迹分析及抗体检测 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 重组载体pET-p35的构建与鉴定 |
| 2.2 p35基因的原核表达 |
| 2.3 表达产物的免疫反应 |
| 2.4 抗血清的制备与检测 |
四、p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用（论文参考文献）
- [1]自噬/Nrf2信号通路在锰致睾丸间质细胞氧化损伤中的相互调控机制研究[D]. 李娇. 遵义医科大学, 2020
- [2]锰对人群和SH-SY5Y细胞中PARK2表达的影响[D]. 范希敏. 遵义医学院, 2017(10)
- [3]烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和XIAP基因对新生大鼠耳蜗锰毒性保护作用的研究[D]. 王璐. 中南大学, 2014(02)
- [4]酿酒酵母应对镉胁迫的分子机理研究[D]. 张丽琳. 天津大学, 2012(06)
- [5]肝性脑病发病机制的研究进展[J]. 高利民,冯义朝,王恬,王建馗. 国际消化病杂志, 2010(02)
- [6]锰对神经细胞凋亡的影响[J]. 郑安,牛丕业. 山西医科大学学报, 2009(09)
- [7]葛根素通过细胞凋亡途径干预帕金森病模型的研究[D]. 程月发. 安徽医科大学, 2009(11)
- [8]黄芪对锰致PC12细胞凋亡的拮抗作用[J]. 陈斯琦,黄国香,李莉,宋世震. 中国冶金工业医学杂志, 2008(05)
- [9]氯化锰对PC12细胞凋亡的诱导作用及机制研究[D]. 王萍. 武汉科技大学, 2008(01)
- [10]杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备[J]. 李玲玲,李朝飞,庞义. 微生物学杂志, 2007(05)