一、人肝癌多药耐药细胞模型的建立（论文文献综述）
李彩琳[1]（2021）在《基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究》文中指出目的:基于AMPK靶点在细胞水平及动物水平上探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU的作用及其机制研究。方法:（1）以人肝癌敏感BEL-7402细胞和人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU为试验对象,ELISA法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞内AMPK含量的影响。RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞中AMPK m RNA含量的影响。（2）噻唑蓝法（MTT）测定AMPK激活剂AICAR作用时间及浓度。（3）划痕试验检测BEL-7402细胞、BEL-7402/5-FU细胞的侵袭转移能力以及美洲大蠊多肽PAE2对耐药细胞侵袭转移能力的影响。（4）RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞中侵袭转移相关因子MMP2,MMP9,m TOR,AKT,4EBP1 m RNA含量的影响。（5）激光共聚焦显微镜观察多肽PAE2对细胞自噬流LC3B的影响。（6）免疫细胞化学法（ICC）检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞自噬相关蛋白P62的影响。（7）RT-PCR检测美洲大蠊多肽PAE2对自噬相关因子ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B,P62等m RNA的影响。（8）以Balb/c-nude为试验对象,裸鼠腋下接种人肝癌BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。给予相应受试药物14天,观察裸鼠一般状态。裸鼠每天称重,隔天用游标卡尺记录肿瘤长径和短径,计算瘤体积。（9）裸鼠取材计算脏器指数及肿瘤重量。（10）裸鼠眼球取血,进行生化指标测定。（11）H&E染色观察多肽PAE2对裸鼠皮下移植瘤肿瘤组织及肝组织病理学的影响。（12）RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对裸鼠肿瘤组织中侵袭转移相关因子MMP2,MMP9,m TOR,AKT,4EBP1 m RNA含量的影响。（13）实时荧光定量法（RT-PCR）检测美洲大蠊多肽PAE2对侵袭转移相关因子ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B,P62等m RNA的影响。结果:（1）ELISA结果显示,肝癌耐药细胞中耐药细胞中AMPK含量明显升高;美洲大蠊多肽PAE2可显着降低耐药细胞中AMPK的含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示耐药细胞中AMPK m RNA表达量显着升高,美洲大蠊多肽PAE2可显着降低耐药细胞中AMPK m RNA的表达（P<0.05）。（2）经MTT法确定AMPK激活剂的IC20为0.006m M即1.55ug/m L（分子量258.23）。并以IC20作用48h作为后续细胞试验中与美洲大蠊多肽PAE2不同剂量组合用。（3）划痕试验结果显示,耐药细胞比敏感细胞具有更强的划痕愈合能力即侵袭转移能力,而美洲大蠊多肽PAE2可抑制细胞24h,48h划痕试验愈合率（P<0.05）。美洲大蠊多肽PAE2和AMPK激活剂联用后可减弱美洲大蠊多肽PAE2对划痕愈合率的影响（P<0.05）。（4）RT-PCR结果显示,相比于敏感细胞,耐药细胞中侵袭转移正相关因子MMP2m RNA、MMP9 m RNA、AKT m RNA表达量显着增高（P<0.05）,肝癌耐药组中m TOR m RNA则呈现增高趋势,而4EBP1 m RNA表达无显着变化。美洲大蠊多肽PAE2可降低耐药细胞中MMP2 m RNA、MMP9 m RNA、AKT m RNA、m TOR m RNA、4EBP1 m RNA、的表达且这种影响可通过与AICAR联用后抵消,但这种抵消效果并不呈现剂量依赖性。（5）激光共聚焦结果显示,与敏感细胞相比,耐药细胞可能具有更强的自噬能力,耐药细胞给予美洲大蠊多肽PAE2后可降低细胞中自噬流的产生,美洲大蠊多肽PAE2和AICAR合用后可加强细胞的自噬。（6）免疫细胞化学法检测自噬标志性蛋白P62在细胞中的表达,免疫细胞化学法结果显示,与敏感细胞相比,耐药细胞中P62表达量相对更少（P<0.05）,而给予美洲大蠊多肽PAE2后,细胞中P62呈现高表达状态;和单独给予美洲大蠊多肽PAE2相比,美洲大蠊多肽PAE2和AICAR联用后对细胞中P62蛋白的降低效果极为显着（P<0.05）。（7）RT-PCR试验结果显示,和敏感细胞相比,耐药细胞中ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B等m RNA呈现高表达状态（P<0.05）,而P62 m RNA则呈现极低表达状态（P<0.05）;单独给予美洲大蠊多肽PAE2后可降低细胞中ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B等m RNA的表达,同时升高P62 m RNA的表达;美洲大蠊多肽PAE2合用AICAR后,可升高ATG5,ATG7,LC3B m RNA的表达,降低P62 m RNA的表达,但联用后各组对PIK3C3 m RNA,BECLIN m RNA的表达并无显着影响或略成降低趋势。（8）裸鼠腋下接种敏感细胞BEL-7402和耐药细胞BEL-7402/5-FU后状态稳定,饮食饮水正常,给药后裸鼠出现体重下降,消瘦等情况。接种敏感细胞的裸鼠皮下移植瘤更容易成瘤,且更稳定,耐药细胞接种肿瘤成瘤率更低,且易发生肿瘤转移。瘤体积计算结果显示,接种肿瘤后5天左右瘤稳定生长,化疗药及美洲大蠊多肽PAE2对肿瘤均有一定的抑制效果。（9）裸鼠取材后称量瘤种后可见,敏感组瘤重远远超过耐药组,美洲大蠊多肽PAE2和索拉非尼能明显降低肿瘤的重量,联合用药组降低肿瘤重量效果更为显着。脏器计算结果显示,皮下接种肝癌敏感细胞和耐药细胞对裸鼠的心、脾、肺、肝、肾指数均无明显影响;给予相应受试药物后索拉非尼组裸鼠肝脏指数明显上升,表明阳性药索拉非尼对裸鼠肝脏具有一定的保护作用。美洲大蠊多肽PAE2低剂量以及美洲大蠊多肽PAE2联合AICAR后裸鼠肺脏指数、肾脏指数升高,可能是由于药物对裸鼠脏器具有一定的保护作用。（10）血清生化指标检测结果显示,敏感组及耐药组谷草转氨酶含量明显升高（P<0.05）,耐药组中谷丙转氨酶明显升高（P<0.05）;单独给予美洲大蠊多肽PAE2及联合给药后裸鼠血清中肌酐尿素氮均呈现上升趋势。（11）从肿瘤组织H&E染色结果可见,与正常组裸鼠肝脏比较,接种肿瘤后裸鼠肝脏细胞排列不规则,有皱缩现象,而给予化疗药物及美洲大蠊多肽PAE2后对耐药细胞的影响并不是很显着。肝癌皮下移植瘤不规则形态,给予相应药物后肿瘤细胞均出现形态变化,细胞核缩小或核碎裂的情况,多呈不规则状,也出现成片坏死的状态。（12）裸鼠皮下移植瘤RT-PCR结果显示,与敏感组比较,耐药组肿瘤组织中侵袭转移因子MMP2、MMP9、m TOR、AKT、4EBP1等m RNA表达量均显着升高（P<0.05）;给予化疗药物索拉非尼及单独给予美洲大蠊多肽PAE2后侵袭转移因子m RNA均显着降低;但PAE2联合用AICAR后仅仅可升高MMP2、MMP9、4EBP1等m RNA的表达量,对组织中m TOR、AKT等m RNA的表达无显着影响。（13）裸鼠RT-PCR结果显示,与敏感组比较,耐药组肿瘤组织中自噬相关因子ATG5、ATG7、BECLIN、PIK3C3、LC3B、P62等m RNA表达量均显着升高（P<0.05）,给予美洲大蠊后自噬相关因子m RNA表达量均降低,美洲大蠊多肽PAE2联合AICAR后可升高肿瘤组织中ATG5、BECLIN、LC3B、P62等m RNA的表达,而对ATG7、PIK3C3等m RNA无显着影响,可降低肿瘤组织中P62 m RNA的表达。结论:（1）耐药细胞BEL-7402/5-FU中AMPK含量及AMPK m RNA呈高表达,美洲大蠊多肽PAE2可降低细胞中AMPK的含量及AMPK m RNA的表达。（2）肝癌BEL-7402/5-FU细胞比BEL-7402细胞具有更强的侵袭转移及自噬能力。（3）美洲大蠊多肽PAE2可抑制耐药细胞的侵袭转移及自噬的发生,且这种抑制作用可通过联用AICAR后部分抵消。（4）美洲大蠊多肽PAE2体外对肝癌细胞侵袭转移、自噬的作用可能是通过AMPK来实现的。自噬是个极其复杂的过程,美洲大蠊多肽PAE2可能只影响其中部分过程。（5）美洲大蠊多肽PAE2对裸鼠肿瘤具有很好的抑制性;接种肿瘤对裸鼠肝脏组织影响极为严重,但短期给予美洲大蠊多肽PAE2对这种损伤无明显效果。（6）接种肝癌肿瘤细胞对裸鼠的肝脏损伤较为明显,化疗药物索拉非尼对肝脏具有一定的保护作用;而化疗药物和多肽PAE2均会增加裸鼠的肾脏负担。（7）裸鼠皮下接种肿瘤后对肝功能具有损伤作用,美洲大蠊多肽PAE2则会增加裸鼠的肾脏负担,（8）在裸鼠皮下移植瘤模型中,美洲大蠊多肽PAE2对侵袭转移及自噬相关因子的影响呈现一定趋势但并不如在细胞中明显。
马莉[2]（2021）在《胰岛素抵抗通过调控HIF-1α促进肝癌细胞多药耐药的机制研究》文中研究表明背景:肝癌是危害我国国民健康的重要疾病,胰岛素抵抗是导致肝癌患者耐药的因素之一。缺氧诱导因子（HIF-1α）是参与糖酵解的关键转录因子,在细胞分化和耐药方面具有重要作用。然而,HIF-1α在伴胰岛素抵抗肝癌患者耐药方面的作用与机制尚不明确。地高辛作为HIF-1α抑制剂在肿瘤联合化疗中具有重要作用,但在肝癌中还没有相关报道。目的:观察胰岛素抵抗对HepG2、SMMC-7721细胞增殖、侵袭和耐药方面的影响。探讨HIF-1α蛋白在胰岛素抵抗促进肝癌细胞多药耐药中所起的作用及地高辛作为化疗药物增敏剂提高肝癌细胞药物敏感性的应用价值。方法:选用人低恶性HepG2和高恶性SMMC-7721细胞作为研究对象,通过高浓度胰岛素诱导,以构建稳定的胰岛素抵抗肝癌细胞模型。利用克隆形成实验和Transwell实验,验证胰岛素抵抗对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。通过荧光定量PCR和Western-blotting实验,验证胰岛素受体（Ins R）、缺氧诱导因子-1（HIF-1α）在诱导组与亲本组的表达变化。通过MTT法和流式细胞术,分别验证胰岛素抵抗对肝癌细胞药物敏感性的影响、地高辛对肝癌细胞的毒性作用以及地高辛与化疗药索拉菲尼（Sorafenib）和丝裂霉素（MMC）联合应用时的抗癌疗效。结果:构建了稳定的胰岛素抵抗肝癌细胞模型（HepG2/IR、SMMC-7721/IR）;胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗量与Ins R表达量较亲本细胞相比,显着降低（P<0.01）;细胞功能试验结果显示胰岛素抵抗可显着提高肝癌细胞的增殖和侵袭能力;MTT结果显示,与对照组相比,胰岛素抵抗组IC50显着提高（MMC组,P<0.01;Sorafenib组,P<0.05）;流式细胞术显示,胰岛素抵抗组凋亡率较亲本细胞显着降低（P<0.05）;与亲本细胞相比,胰岛素抵抗组HIF-1α蛋白在m RNA水平与蛋白水平均显着提高（HepG2细胞组,P<0.01,SMMC-7721细胞组,P<0.05）;地高辛对肝癌细胞毒性较小,在高浓度（100μmol/L）地高辛作用下,细胞仍保持较高存活率（HepG2:67.696±2.520%、HepG2/IR:74.859±1.049%、SMMC-7721:45.999±1.357%、SMMC-7721/IR:52.154±0.749%）;Western-blotting显示地高辛可特异性抑制HIF-1α表达;地高辛与化疗药联合应用后IC50较地高辛单用组显着降低（P<0.01）结论:（1）胰岛素抵抗可促进肝癌细胞增殖和侵袭;（2）胰岛素抵抗与肝癌多药耐药密切相关;（3）胰岛素抵抗可促进HIF-1α蛋白表达,这可能是诱发肝癌细胞耐药的因素之一;（4）地高辛可特异性抑制HIF-1α表达;（5）地高辛有望成为一种新的化疗药增敏剂。
廖俊[3]（2020）在《苦参素抑制MiR-181a表达对人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM裸鼠移植瘤耐药性的影响及相关机制研究》文中研究指明目的:探讨苦参素（oxymatrine,OM）能否在体内环境中通过抑制Mi R-181a的表达而影响人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM裸鼠移植瘤的耐药性,并研究其可能机制。方法:选用人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM细胞在裸鼠腋下接种,创建裸鼠皮下移植瘤模型。将42只雌性裸鼠随机分成6组（每组7只）:miR-181a mimic组（50μg/ml）、苦参素组（100mg/kg）、苦参素+miR-181a mimic组（100mg/kg+50μg/ml）、阿霉素（adriamycin,ADM）组（6mg/kg）、miRNA mimic NC组（50μg/ml）、空白对照组（PBS50μg/ml）,每只裸鼠每次0.1ml尾静脉注射。每两天一次,药物干预18d后,取出瘤体,用公式计算肿瘤体积。苏木精—伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）法观察组织的细胞病变情况,免疫组化及蛋白质免疫印迹实验（western blot,WB）法检测miR-181a靶向蛋白Bim及耐药指标P-gp蛋白的表达,实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q PCR）检测Bim对应基因BCL2L11、P-gp对应耐药基因ABCB1及miR-181a表达的情况。结果:（1）接种HepG2/ADM 15d后,造模成功,裸鼠成瘤率为100%。（2）干预18d后,阿霉素组、空白对照组及miRNA mimic NC组之间移植瘤体积差异无统计学意义（P>0.05）,其他组之间移植瘤体积两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）,miR-181a mimic组对肿瘤的生长促进作用最强,苦参素+miR-181a mimic组的促进效果次之,苦参素组对肿瘤的生长抑制作用明显,单独使用阿霉素对人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM移植瘤效果较差。（3）HE染色结果显示,阿霉素对人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM基本无效,苦参素有促进肿瘤组织坏死作用,miR-181a mimic有抑制肿瘤组织坏死作用.（4）免疫组化及WB结果显示,苦参素组Bim蛋白表达最高,使用miR-181a mimic的miR-181a mimic组和苦参素+miR-181a mimic组中Bim蛋白表达明显降低（P<0.05）;miR-181a mimic组P-gp蛋白表达最高,其次是苦参素+miR-181a mimic组和阿霉素组,苦参素组中P-gp蛋白表达明显降低（P<0.05）。（5）实时荧光定量PCR结果显示,苦参素组BCL2L11 m RNA表达最高,使用miR-181a mimic的miR-181a mimic组和苦参素+miR-181a mimic组中BCL2L11 m RNA表达明显降低（P<0.05）;miR-181a mimic组中ABCB1 m RNA表达最高,其次是苦参素+miR-181a mimic组和阿霉素组,苦参素组中ABCB1 m RNA表达最低（P<0.05）;miR-181a mimic组miR-181a表达最高,其次是苦参素+miR-181a mimic组,苦参素组中miR-181a表达最低（P<0.05）。结论:（1）苦参素能抑制HepG2/ADM耐药裸鼠移植瘤的生长,改善耐药裸鼠一般情况。（2）miR-181a在HepG2/ADM耐药移植瘤裸鼠体内提高ABCB1 mRNA及P-gp蛋白的表达,其机制可能与下调Bim蛋白的表达相关。（3）苦参素在HepG2/ADM耐药移植瘤裸鼠体内降低ABCB1 m RNA及P-gp蛋白的表达,其机制可能是通过抑制miR-181a的表达,提高Bim蛋白的表达,从而激活线粒体凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡来逆转肝癌的多药耐药性。
吕鸿[4]（2020）在《美洲大蠊多肽PAE2逆转HepG2/ADM多药耐药性的作用及机制研究》文中研究说明目的:探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM多药耐药（MDR）的作用及其机制。方法:通过以下方法从体内外用药确定美洲大蠊多肽PAE2单体逆转肝癌MDR的作用及机制。（1）以人肝细胞癌敏感细胞株HepG2,耐ADM的耐药细胞株HepG2/ADM和Balb/c-nude小鼠为研究对象;（2）MTT法检测HepG2/ADM细胞的多药耐药性;确定美洲大蠊提取物多肽PAE2、CⅡ-3、脱脂膏的逆转剂量;（3）通过激光共聚焦显微镜观察HepG2/ADM细胞内ADM的累积情况;（4）采用免疫印迹法检测多肽PAE2对HepG2/ADM细胞中相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9、PARP的影响;（5）采用免疫细胞化学染色法和RT-qPCR法检测HepG2/ADM细胞中P-gp、MRP、LRP、BCRP、PKC、GST-π、Topo II的蛋白和m RNA的相对表达量,探究PAE2逆转MDR的机制;（6）采用免疫细胞化学染色法检测HepG2/ADM细胞中VEGF蛋白的相对表达量,探究PAE2对HCC血管生成能力的影响;（7）采用Balb/c-nude小鼠建立HepG2和HepG2/ADM细胞的腋下移植瘤模型;（8）观察移植瘤裸鼠的一般状态、免疫器官、肝肾功能的改变;（9）采用与细胞实验相同的方法检测多肽PAE2对肿瘤生长抑制、诱导肿瘤细胞调亡、调节肿瘤组织多药耐药相关蛋白和相关酶及血管生成的影响;（10）HE染色法检测肿瘤组织病理学改变。结果:（1）MTT结果显示,HepG2/ADM细胞对临床常用的五种化疗药物5-FU、ADM、CTX、VCR、OXP均出现了不同程度的耐药,耐药倍数在2～5之间,表现出交叉耐药性。（2）MTT法确定PAE2的逆转剂量,经SPSS计算得PAE2对HepG2/ADM细胞作用48 h的IC5（3.21±1.09μg/m L）、IC10（22.19±7.10μg/m L）、IC20（183.19±64.38μg/m L）,分别作为实验中美洲大蠊多肽PAE2的低、中、高剂量。（3）高剂量的PAE2与5-FU、AMD、VCR、CTX和OXP合用后,可不同程度的逆转多药耐药HepG2/ADM细胞对不同化疗药物的耐药性。逆转指数分别为1.15、1.16、1.25、1.94、1.39,表明PAE2具有逆转MDR作用。（4）激光共聚焦实验结果显示PAE2能促进HepG2/ADM细胞株对ADM的摄取,减少耐药细胞对药物的外排,改善HepG2/ADM细胞株的交叉耐药性。（5）免疫印迹实验表明,PAE2主要通过HepG2/ADM异源二聚体参与的信号通路,激活凋亡蛋白的表达来诱导HepG2/ADM细胞株的凋亡;PAE2对于Caspase-9和PARP蛋白介导的凋亡通路也有一定影响。（6）免疫细胞化学染色结果显示,与HepG2细胞相比,HepG2/ADM细胞株中的P-gp、LRP、BCRP、VEGF、PCK、GST-π、Topo II表达量显着上调,存在统计学差异,与HepG2/ADM细胞株产生MDR作用相关,PAE2对P-gp、LRP、BCRP、VEGF、PCK、GST-π、Topo II蛋白的表达有明显的抑制作用。（7）RT-qPCR结果显示HepG2/ADM细胞株产生MDR的作用是与MDR1、LRP、BCRP、GST-π、Topo II高表达,造成药物外排,摄取不足,细胞内的药物代谢异常相关,PAE2对MDR相关蛋白和相关酶m RNA的表达有明显的抑制作用,具有统计学意义。（8）在Balb/c-nude小鼠成瘤的实验中,经过对脏器指数、BUN、Cr、AST、ALT的检测,显示美洲大蠊提取物相对安全,对裸小鼠主要脏器无毒副作用,而且可降低移植瘤小鼠的肾损伤,有保护心肝细胞的作用,静脉给药方式在此方面的作用可能由于口服给药组方式。（9）PAE2的所有剂量的两种给药途径均能有效抑制体内HCC肿瘤的生长,其中中剂量静脉给药组抑瘤作用最好;（10）免疫印迹法实验中可以观察到PAE2对Balb/c-nude小鼠体内肿瘤凋亡能力影响主要是由Bax/Bcl-2和PARP分子相关的信号通路来介导。（11）免疫组织化学染色法结果显示P-gp、LRP、BCRP、GST-π、Topo II、VEGF在耐药株的组别中的表达量是高于敏感株的组别的,说明了体内HCC产生MDR作用与上述因子的高表达相关;PAE2两种给药方式可抑制体内HCC肿瘤中LRP、BCRP、PKC、GST-π、Topo II、VEGF的表达。（12）RT-qPCR结果显示MRP、BCRP在耐药株中的表达量高于敏感株,PAE2能抑制体内HCC肿瘤内MDR1、MRP、LRP、BCRP、PKC、GST-π、Topo II、VEGF m RNA的表达;（13）在病理学HE染色观察中,Balb/c-nude小鼠经PAE2给药后的肿瘤组织,肿瘤细胞的体积减小,排列稀疏,出现了大面积的凝固性坏死和核碎裂,肿瘤的恶性程度降低,提示PAE2在体内仍能发挥良好的抗肿瘤作用;结论:（1）HepG2/ADM细胞具有多药耐药特征,与HepG2相比,HepG2/ADM细胞在Balb/c-nude小鼠皮下移植成瘤后同样体现出MDR特征;（2）美洲大蠊脱脂膏、CⅡ-3、多肽PAE2体内外均能够逆转人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的多药耐药性;（3）美洲大蠊多肽PAE2逆转HepG2/ADM细胞MDR的作用优于CⅡ-3和脱脂膏;（4）美洲大蠊多肽PAE2可能通过影响细胞相关凋亡蛋白和介导多药耐药的相关蛋白和酶的表达,减少药物外排,促进细胞内药物累积、细胞凋亡,从而逆转人肝癌多药耐药细胞HepG2/ADM的耐药性。
黄钰淑[5]（2020）在《苯硼酸功能化的智能纳米药物传递系统》文中认为为了最大程度地利用实体瘤的高渗透与滞留（EPR）效应,纳米药物需要在体内实现长循环。因此,纳米药物通常使用聚乙二醇（PEG）修饰以减少蛋白吸附,单核吞噬细胞系统的清除,以及延长药物循环时间。然而,PEG化也限制了肿瘤细胞对纳米药物的摄取,限制了靶向肿瘤细胞的有效的药物递送。本论文为解决以上问题,选取苯硼酸（PBA）为靶向基团,制备了一系列载药胶束,并对其药物传递效果进行评价。论文第一章首先对纳米药物传递系统、聚合物胶束、PEG化、PEG困境及PBA的生物应用前景进行概述,随后提出论文研究思路和主要内容。随后在第二章中以喜树碱（CPT）为模型药物,设计并合成了聚合物PEGBC-PGlu-ss-CPT,并以此制备了一种CPT前药胶束PEG-BC@PGlu-ss-CPT作为智能纳米平台,以增强细胞摄取和实现CPT的还原响应的控制释放。通过引入苯硼酸酯键,实现了酸触发的PEG壳层的脱去,随后暴露出的苯硼酸基团介导内吞,增强细胞摄取。此外,CPT通过二硫键与前药单体结合,实现了还原条件触发的药物释放。合成的聚合物前药在水溶液中能够自组装成球形纳米胶束。同时,与唾液酸低表达的HL7702细胞相比,唾液酸高表达的HepG2细胞显示出对PEG-BC@PGlu-ss-CPT的高摄取能力。另外,随着细胞外pH值的降低,苯硼酸酯降解的速率加快,HepG2细胞对前药胶束的摄取随之增强,前药胶束对HepG2细胞的抗增殖作用也随之增强。尽管第二章为克服PEG困境以及去PEG化的策略提供了新思路,但是细胞外去PEG化是一个时间依赖的过程。因此,在论文第三章中,为了使纳米药物传递系统能够尽快锚定肿瘤细胞,我们直接以苯硼酸作为靶向基团,设计并合成了聚合物PBA-PEG-b-P（Glu-co-GluDA）并以此制备了一种仿生的纳米平台,该纳米平台具有被细胞快速内吞、溶酶体pH触发药物释放和减少药物外排的功能。合成的聚合物结构有利于阿霉素（DOX）的包封,制备的载药胶束具有较高的载药量和效率。该平台引入基于多巴胺与铁离子配位的核交联策略,以提高纳米微粒的稳定性,实现溶酶体pH控制的药物释放。该纳米平台即使分散在良溶剂中也能保持结构完整性,显示出在静脉注射后抵抗血浆无限稀释的潜力。此外,该纳米平台提高了细胞对DOX的摄取,具有显着的抗增殖作用。与盐酸阿霉素相比,其药物外排明显降低,因此显着提高了纳米药物对细胞的毒性。该纳米平台对肿瘤生长的抑制率为70%,展现了该纳米平台的多功能性。在第三章聚合物结构的基础上,我们在第四章中设计并合成了一种前药聚合物PBA-PEG-P（Glu-co-GlussCPT）并以此制备了一种基于可逆核交联策略的智能前药递送纳米平台,旨在更好地稳定纳米胶束并增强细胞内吞。CPT通过二硫键与聚合物共价结合,实现肿瘤细胞内还原环境触发的药物释放。同时,使用二硫键形成可逆核交联结构,能够响应肿瘤细胞内还原环境,实现胶束在细胞内的解交联。结合前药策略和交联策略,CPT前药胶束可以承受无限稀释,携带更多治疗分子到肿瘤组织,最大限度地减少药物提前释放。同时,前药胶束具有增强的内吞效率和显着的抗肿瘤细胞增殖活性。对小鼠肝癌移植瘤和人肝癌移植瘤模型而言,该前药纳米平台展示了显着的体内抗肿瘤效果,未表现出明显的系统毒性,具有良好的生物相容性。因为肿瘤细胞的多药耐药以及转移是肿瘤化学治疗的主要障碍,因此我们在第五章中参照第四章合成前药的方法调节CPT比例后作为载体包裹DOX,制备了共传递胶束DUAL-M,该胶束能够通过PBA与细胞表面唾液酸的特异性结合而增强多药耐药细胞对药物的细胞摄取,同时减少药物外排,能够在多药耐药细胞内微环境刺激下释放出CPT和DOX,达到对多药耐药细胞的协同抗增殖效果,并且能够抑制多药耐药细胞的迁移与侵袭。综上所述,为了最大程度的利用实体瘤的EPR效应,提高药物的靶向性,克服PEG困境,增强肿瘤细胞对药物的摄取,实现肿瘤细胞内微环境控制的药物释放,降低药物的毒副作用,抑制肿瘤细胞增殖和转移,本论文以苯硼酸为重要功能基团构建了四种抗肿瘤聚合物胶束系统,分别从聚合物分子水平、胶束水平、细胞水平及动物水平的角度对聚合物胶束系统进行了研究及评价。其研究结果为构建多功能化的聚合物胶束作为抗肿瘤药物的靶向给药体系提供了新思路。
何晓晓[6]（2020）在《阿帕替尼抑制人肝癌细胞侵袭、转移和多药耐药性的作用及机制探讨》文中提出第一部分阿帕替尼通过调节NF-κB信号通路下调MMP相关蛋白表达,从而抑制肝癌细胞的侵袭和转移【目的】我们旨在研究阿帕替尼在体外是否对人肝癌细胞的侵袭和转移具有抑制作用,并初步探讨其作用机制。【方法】（1）通过划痕试验和Transwell侵袭试验检测阿帕替尼对Hep G2,Hep3B,Huh7和SMMC-7721这四种人肝癌细胞系迁移和侵袭的影响。（2）实时定量逆转录PCR（q RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）分析阿帕替尼处理后Hep G2和Hep3B这两种人肝癌细胞中金属基质蛋白（MMPs）家族、金属蛋白酶内源性组织抑制剂（TIMPs）家族基因以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。【结果】（1）阿帕替尼对Hep G2,Hep3B,Huh7和SMMC-7721这四种人肝癌细胞的迁移和侵袭均具有明显的抑制作用。（2）给予阿帕替尼处理后,Hep G2和Hep3B细胞系中MMP-1,-2,-3,-7,-9,-10,-11和-16的表达水平均明显下调。（3）相反,TIMP-3和TIMP-4的表达水平明显上调,TIMP-1和TIMP-2的表达水平未见明显变化。（4）除此之外,与对照组相比,阿帕替尼处理组细胞中IκBα和NF-κB p65的磷酸化水平明显降低。【结论】（1）阿帕替尼通过下调MMP家族基因中的MMP-1,-2,-3,-7,-9,-10,-11和-16表达来抑制人肝癌细胞的侵袭和迁移;（2）MMP相关基因表达的下调与其内源性组织抑制剂TIMP-1和TIMP-2的表达上调相关;（3）阿帕替尼的以上作用可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活来实现的。第二部分阿帕替尼通过调节NF-κB信号通路的激活下调MDR相关蛋白表达,从而逆转肝癌细胞对化疗药物的多药耐药性【目的】本研究旨在研究阿帕替尼是否对人肝癌细胞的多药耐药性具有逆转作用,并进一步探讨其相关作用机制。【方法】（1）首先通过逐渐增加培养基中化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）的浓度来建立Hep3B/5-Fu多药耐药细胞系。（2）细胞增殖实验（CCK-8）和流式细胞仪检测Hep3B/5-Fu细胞的多药耐药性以及阿帕替尼对其多药耐药性的逆转作用。（3）NF-κB p65特异性Si RNA转染Hep3B/5-Fu多药耐药细胞系,检测阿帕替尼处理后Hep3B/5-Fu中MDR和NF-κB信号通路相关基因表达的变化。（4）通过皮下注射Hep3B/5-Fu细胞建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,随机分为8组:对照组;阿帕替尼单药治疗组（50 mg/kg/天）;5-Fu单药治疗组（20mg/kg,每周给药两次）;奥沙利铂单药治疗组（6 mg/kg,每周给药两次）;阿帕替尼+5-Fu联合治疗组,阿帕替尼+奥沙利铂联合治疗组;5-Fu+奥沙利铂联合治疗组;阿帕替尼+5-Fu+奥沙利铂三药联合治疗组。每隔2天测量皮下移植瘤的体积。（5）末次给药24小时后处死裸鼠并剥离瘤体,通过实时荧光定量PCR,免疫组织化学染色和Western blot检测组织中多药耐药基因的表达水平。【结果】（1）成功建立Hep3B/5-Fu人肝癌细胞多药耐药系,Hep3B/5-Fu细胞显示出5-Fu的高耐药性（耐药指数46.14±10.26）,其对表柔比星和奥沙利铂的药物敏感均降低（耐药指数分别为4.31±0.90和6.61±0.78）。（2）阿帕替尼可逆转Hep3B/5-Fu细胞的耐药性并促进其凋亡,逆转指数为2.193.86,并随着阿帕替尼浓度的增加而增加。（3）转染NF-κB p65 si RNA后,Hep3B/5-Fu细胞中的耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显下调。（4）在转染的Hep3B/5-Fu多药耐药细胞中进行试验,发现与对照组相比,阿帕替尼治疗组细胞中P-gp,LRP,GST-pi以及p-IκBα,p-p65的表达显着降低。（5）动物实验结果显示,联合治疗（阿帕替尼加化疗药物）组的肿瘤生长速度显着低于单纯化疗药物治疗组,三药联合治疗组（阿帕替尼+5-Fu+奥沙利铂）在整个实验过程中显示出最慢的生长速度,并且治疗结束后瘤体的体积最小。（6）从剥离的移植瘤中提取蛋白和m RNA,再次验证了阿帕替尼可以抑制多药耐药相关基因MDR1,LRP,MRP2和GST-pi表达的作用。【结论】（1）阿帕替尼可以促进肝癌多药耐药细胞系Hep3B/-5Fu的凋亡并逆转其多药耐药性;（2）阿帕替尼通过下调多药耐药相关基因MDR1,LRP,MRP2和GST-pi的表达来逆转人肝癌细胞对化疗药物产生的多药耐药性;（3）该药对肝癌细胞MDR的逆转作用可以通过抑制NF-κB信号通路的激活来实现。
李晶晶[7]（2020）在《狼毒大戟提取物逆转乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR对阿霉素耐药的实验研究》文中认为目的:探讨狼毒大戟提取物是否能逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR对阿霉素的耐药。材料与方法:1.研究对象:人乳腺癌细胞株MCF-7（luminal B型）及乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR。2.实验药物:阿霉素、狼毒大戟提取物。3.方法:（1）CCK-8法检测阿霉素、狼毒大戟提取物及两药共同作用24h后对MCF-7和MCF-7/ADR细胞的细胞活性,分别计算IC50,MCF-7/ADR细胞的耐药指数（RI）,验证MCF-7/ADR细胞的多药耐药性,并计算狼毒大戟的低毒剂量（细胞存活率90%以上）,将其定为后续研究的浓度与阿霉素共同作用。（2）检测狼毒大戟提取物对MCF-7/ADR细胞阿霉素耐药的逆转作用:流式仪检测狼毒大戟提取物、阿霉素单独及两药共同作用对MCF-7、MCF-7/ADR细胞周期及凋亡的影响。结果:1.狼毒大戟提取物对MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,并呈剂量-效应关系,IC50分别为78.52±1.87mg/m L,83.36±1.09mg/m L,两者有统计学差异（P<0.05）;当狼毒大戟提取物浓度为7.5mg/m L时MCF-7及MCF-7/ADR细胞存活率均大于90%,定为后续的逆转剂量。2.阿霉素对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有增殖抑制作用,阿霉素对MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞的IC50分别为4.32±0.12mg/m L,68.31±0.74mg/m L,耐药指数为15.81（P<0.05）。3.阿霉素与低毒剂量狼毒大戟提取物共同干预MCF-7、MCF-7/ADR细胞后,两种细胞的IC50分别为1.49±0.06mg/m L,45.95±0.36mg/m L,耐药指数为10.64,逆转指数为1.49（P<0.05）。4.低毒剂量狼毒大戟提取物单药、阿霉素单药及两药共同作用于MCF-7细胞、MCF-7/ADR细胞24h后,行细胞周期检测,与对照组及单药组相比两药联用能引起MCF-7细胞、MCF-7/ADR细胞G0/G1期增多（P<0.05）,狼毒大戟提取物与阿霉素共同作用可使MCF-7细胞、MCF-7/ADR细胞阻滞于G0/G1期。5.低毒剂量狼毒大戟提取物与阿霉素单独及联合作用于MCF-7、MCF-7/ADR细胞,与对照组及单药组相比,联合组细胞凋亡率明显增高（P<0.05）,狼毒大戟提取物与阿霉素共同作用可诱导MCF-7、MCF-7/ADR细胞发生凋亡。结论:1.狼毒大戟提取物抑制MCF-7、MCF-7/ADR细胞增殖,且存在着明显的剂量-效应关系（P<0.05）。2.低毒剂量的狼毒大戟提取物与阿霉素共同作用,能使MCF-7细胞、MCF-7/ADR细胞阻滞于G0/G1期。3.低毒剂量的狼毒大戟提取物与阿霉素共同作用可促进MCF-7细胞、MCF-7/ADR细胞凋亡。4.狼毒大戟提取物可能是通过抑制增殖,促进细胞凋亡并将细胞阻滞于G0/G1期来部分逆转MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药。
范冰冰[8]（2020）在《赤芍总苷抗肝肿瘤药效物质分析及作用机制研究》文中提出目的赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veichii Lynch的干燥根。味苦,性微寒,归肝经,有清热凉血、散瘀止痛的功效。用于热入营血,温毒发斑,吐血衄血,目赤肿痛,肝郁胁痛,经闭痛经,症瘕腹痛,跌扑损伤,痈肿疮疡等症。赤芍总苷具有多种药理作用,如抗血栓、抗氧化、抗肿瘤、抗内毒素、保护神经系统和心脏等作用。本课题对赤芍的有效组分赤芍总苷进行提取、纯化及药效筛选研究,采用UPLC-QTOF-MS等现代分析仪器和方法对赤芍总苷的化学成分进行研究;采用网络药理学研究方法,利用疾病靶点数据库、Swiss Target Prediction、SEA等网络数据库平台的大数据资源,揭示赤芍总苷治疗肝癌所调控的靶点及信号通路。通过H22荷瘤肝癌小鼠模型及体外Hep G2细胞模型,开展赤芍总苷抗肿瘤体内及体外药理、药效学研究,明确赤芍总苷是否具有抗肝肿瘤作用;并从细胞周期、凋亡、相关基因、蛋白角度及对细胞色素P450酶不同亚型活性及基因水平的影响对赤芍总苷发挥抗肝肿瘤作用的机理进行研究;通过大鼠血清中肝损伤、氧化应激、线粒体损伤指标的含量变化,探究赤芍总苷是否引起大鼠肝脏毒性。本研究明确赤芍总苷具有抗肝肿瘤作用,并从多角度阐释其作用机制,为赤芍总苷的临床应用及进一步开发利用提供实验依据和理论基础。方法1.采用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法,通过L9（34）正交试验设计,以液料比、提取时间、提取次数为考察因素,以芍药苷、赤芍总苷、出膏率的综合评分为评价指标,筛选赤芍总苷最佳提取工艺;采用紫外-可见分光光度法,结合大孔树脂技术,通过静、动态吸附与解吸试验,筛选赤芍总苷的最佳纯化工艺。采用MTT法,通过肝癌Hep G2细胞增殖抑制率比较赤芍、赤芍总苷体外抗肝肿瘤作用。2.采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,结合对照品、文献、相关数据库信息比对的办法,对赤芍总苷化学成分进行研究;采用分子网络研究方法,构建赤芍总苷分子离子可视化网络图,结合质谱相关信息,全面表征赤芍总苷成分。3.采用体外药效MTT法,以细胞增殖抑制率为评价指标,开展赤芍总苷对肝癌Hep G2细胞增殖影响的研究;通过建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,以抑瘤率、脏器指数、瘤体病理切片及血清中细胞因子ALT、AST、FAS、FASL、IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量为考察指标,开展赤芍总苷体内抗肝肿瘤药效学研究。4.采用网络药理学研究方法,利用TCMSP、SEA及Swiss Target Prediction网络数据库平台的大数据资源,挖掘赤芍总苷成分调控靶点基因信息;利用Drugbank、Dis Ge NET、及TTD数据库,查找肝癌相关靶点,从而得到赤芍总苷成分调控肝癌的生物学靶点;采用STRING等数据库,得到靶点之间蛋白互作网络图,探讨靶点之间的相互关系,并通过对靶点进行GO基因功能注释分析,明确赤芍总苷成分参与调控肝癌生物过程、细胞组成和分子功能;进而利用KEGG数据库对靶点进行信号通路富集分析,从大数据方面揭示赤芍总苷治疗肝癌所调控的靶点及信号通路。5.利用流式细胞仪,采用Annexin V-FITC/PI双染色法,开展赤芍总苷对肝癌Hep G2细胞凋亡影响的研究;采用PI单染色法,开展赤芍总苷对肝癌Hep G2细胞周期影响的研究。6.采用实时荧光定量q RT-PCR技术,检测经赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞后,细胞中相关基因的表达量;采用Western Blot技术,检测经赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞后,细胞中相关蛋白的表达量,分别从基因及蛋白水平阐释赤芍总苷抗肝肿瘤作用机制。7.通过ELISA法检测大鼠肝脏中细胞色素P450亚酶CYP1A2,CYP3A4,CYP2D6,CYP2C9,CYP2E1活性,采用实时荧光定量q RT-PCR技术检测CYP1A2,CYP3A2,CYP2D1,CYP2C11,CYP2E1 m RNA水平的表达,考察赤芍总苷对细胞色素P450酶不同亚型的影响。8.通过ELISA法检测大鼠血清中ALT、AST、ALP及γ-GT的含量变化,探究赤芍总苷对肝脏组织的损伤程度;通过ELISA法检测大鼠血清中SOD、MDA及GSH的含量变化,探究赤芍总苷对肝脏组织氧化损伤的程度;通过ELISA法检测大鼠血清中Na+-K+-ATPase的含量变化,探究赤芍总苷对肝脏组织线粒体的损伤程度。结果1.赤芍总苷的最佳提取工艺为8倍量30%乙醇,回流提取2次,每次2 h;赤芍总苷的最佳纯化工艺为选用HPD-700大孔吸附树脂,上样生药浓度为0.1g/m L,树脂比上柱量为0.3g/m L（原药材/湿树脂）,2BV水除杂,5BV 30%乙醇洗脱,即得赤芍总苷化学物质组分。赤芍、赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞的增殖抑制率分别为69.66%、66.00%。2.采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,经正离子检测模式,经对照品、文献与相关数据库信息确定芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷;比对推测出芍药内酯苷异构体、毛蕊异黄酮苷、牡丹皮苷E、没食子酰芍药苷或异构体构建赤芍总苷的分子可视化网络,共找到5个分子网络成分簇,其中一个分子簇为芍药苷及其相关化合物。3.利用TCM-SP、SEA及Swiss Target Prediction网络数据库平台,挖掘出赤芍总苷成分共调控139个潜在靶蛋白。利用Drugbank、Dis Ge NET、及TTD数据库,共找到5727个癌症相关靶点。通过VENNY软件对赤芍总苷各成分靶蛋白与肝癌潜在靶点进行映射,共得到99个交集靶点,主要包含IL-2、Bcl-2、TNF、PTEN等。通过靶点之间蛋白互作网络图,明确靶点之间的相互关系,并通过对靶点进行GO基因功能注释分析,明确赤芍总苷成分在生物过程方面主要富集于细胞增殖的正调控、凋亡过程的负调控、MAPK级联、炎症反应的负性调节等;在细胞组成方面主要富集于线粒体、细胞外间隙、死亡诱导信号复合物等;在分子功能方面主要富集于一氧化氮合酶调节活性、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性、生长因子活性等各种蛋白酶活性。KEGG通路富集分析结果显示有84条通路参与到赤芍总苷作用于肝癌细胞的过程,主要包括MAPK、PI3K/Akt、VEGF、肿瘤坏死因子、癌症中心碳代谢等信号通路。4.体外药效实验结果显示,赤芍总苷1mg/m L给药浓度作用于肝癌Hep G2细胞24h,36h,48h的抑制率分别为66.00%、72.52%、74.10%,IC50值分别为0.71、0.57、0.52mg/m L;体内药效实验结果显示,环磷酰胺组、赤芍总苷低、中、高剂量组的抑瘤率分别为57.61%、23.06%、36.64%、48.13%,除赤芍总苷低剂量组,肿瘤的抑制作用均超过30%（中药的瘤重抑制率>30%,评定药物具有抑瘤作用）,符合相关要求。5.与模型组比较,赤芍总苷高、中剂量组血清中ALT、AST、FAS、FASL的含量显着降低、IL-2的含量显着升高,均有显着性差异（p<0.01或p<0.05）,赤芍总苷各剂量组血清中IFN-γ、TNF-α的含量显着降低,均有显着性差异（p<0.01）。6.赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞36h,低、中、高剂量组的凋亡率分别为11.7%、16.9%、22.9%;与模型组比较,赤芍总苷中剂量组肝癌Hep G2细胞G2/M期的比例降低。7.赤芍总苷作用于肝癌Hep G2细胞36h后,与模型组比较,赤芍总苷组细胞中Akt、Bcl-2、PI3K、MEK、ERK m RNA和蛋白的水平均不同程度降低,均有显着性差异（p<0.01）,PTEN、Bax m RNA的水平均不同程度升高,均有显着性差异（p<0.01）。8.与空白组比较,赤芍总苷组CYP1A2活性显着增强,有显着性差异（p<0.01）,CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP2E1活性没有显着性变化;与空白组比较,赤芍总苷组CYP1A2 m RNA水平显着升高,有显着性差异（p<0.01）,CYP3A2,CYP2D1,CYP2C11和CYP2E1 m RNA水平没有显着性变化。9.与空白组比较,赤芍总苷组大鼠血清中ALT、AST、ALP、γ-GT、SOD、MDA、GSH及Na+-K+-ATPase的含量没有显着变化。结论1.本课题优化了赤芍总苷的提取纯化方法,其工艺简单且操作方便,为赤芍总苷的后续药效研究奠定了一定基础。2.采用UHPLC-Q-TOF-MS技术、构建赤芍总苷化学成分网络,能够全面表征赤芍总苷成分,并能呈现成分之间的关系,为其开发利用及药效研究奠定实验基础。3.采用网络药理学研究手段,挖掘赤芍总苷成分调控肝癌的生物学靶点,通过蛋白网络互作分析、基因功能注释分析、靶点调控通路分析等,实现赤芍总苷抗肝肿瘤作用机制的快速、系统分析,发现赤芍总苷抗肝癌作用可能与PI3K/Akt、MAPK等信号通路相关。4.赤芍总苷对Hep G2肝癌细胞增殖有抑制作用,其作用机制是通过诱导Hep G2细胞凋亡、降低G2/M期细胞的比例,扰乱细胞正常分裂状态达到抑制作用。5.赤芍总苷能够减轻肝脏损伤程度,对肝脏具有一定的保护作用。6.赤芍总苷发挥抗肝肿瘤作用可能与抑制Hep G2细胞的增殖、诱导其凋亡,调控PI3K/Akt及MEK/ERK信号通路有关。7.赤芍总苷可能通过诱导CYP450酶亚型CYPl A2的活性发挥抗肝肿瘤作用。8.赤芍总苷在一定剂量范围内及一定给药时间内,不影响肝脏的功能,没有肝毒性,值得进一步深入研究。
邓凤莲[9]（2019）在《苦参素通过下调ABCG2表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用》文中指出目的:探讨苦参素能否通过调控三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2）表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用。方法:裸鼠腋下接种人肝癌细胞HepG2/阿霉素耐药细胞（HepG2/ADM）,构建移植瘤模型。将20只雌性裸鼠随机分成对照组、阿霉素组、苦参素组、联合组（阿霉素联合苦参素）。干预14d后,取出瘤体,HE染色法观察移植瘤组织细胞的形态,RT-qPCR检测ABCG2的mRNA水平,免疫组化及ELISA法检测ABCG2蛋白水平,并对组间数据进行对比。结果:（1）我们观察发现药物干预以后对照组裸鼠刚开始精神状态及生活习性无明显改变,到后期随瘤体增大而表现为精神及睡眠不佳,进食减少;阿霉素组裸鼠表现为精神差、活动量下降、进食及大小便减少,而苦参组及联合组裸鼠一般情况良好,精神状态、睡眠、饮食及大小便均未见明显改变。（2）HE染色法结果显示:与对照组相比,阿霉素组抗移植瘤坏死作用不明显,其他两组有促移植瘤坏死作用;与单独苦参素组相比,联合组促移植瘤坏死效果更好。（3）RT-qPCR检测结果显示:与对照组相比,阿霉素组ABCG2 mRNA表达上升,苦参素组和联合组ABCG2 mRNA表达下降（P<0.05）。（4）免疫组化结果显示ABCG2阳性染色呈棕色,大多分布在胞浆内,部分在胞膜;与对照组相比,阿霉素组ABCG2蛋白表达较高,苦参素组和联合组中ABCG2蛋白水平明显下降（P<0.05）。（5）ELISA结果显示:与对照组相比,阿霉素组ABCG2蛋白表达上调,苦参素组和联合组中ABCG2蛋白表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1、苦参素可减轻阿霉素的药物不良反应,改善实验裸鼠生存质量;2、苦参素可提高阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的抑瘤作用及促进肝癌对阿霉素的敏感性,其机制可能与下调ABCG2 mRNA与蛋白表达有关。
黎梨[10]（2019）在《LncRNA H19影响肝癌细胞HepG2/ADM的多药耐药性及苦参素逆转肝癌耐药作用新机制研究》文中指出目的:探究在肝癌中LncRNA H19对化疗多药耐药性的影响及相关作用通路与苦参素逆转肝癌耐药作用的新机制。方法:（1）四甲基偶氮唑盐（Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT）法检测HepG2/ADM转染后对化疗药5-Fu、ADM、CDDP敏感性的变化。（2）采用慢病毒构建及质粒转染技术,抑制及增强细胞中H19的表达后,在HepG2/ADM及HepG2细胞中,检测对化疗药物敏感性的变化,并采用qPCR法检测转染前后H19的表达,应用Western blot检测转染前后P-gp、ZEB1及EC蛋白的表达变化,用流式细胞术检测转染前后细胞凋亡的变化情况,探讨H19影响肝癌化疗药耐受性的影响通路。（3）应用qPCR检测苦参素作用后H19的表达变化,用Western blot法检测P-gp、ZEB1及EC蛋白的表达变化,探讨苦参素逆转肝癌化疗耐药的可能分子机制。结果:（1）qPCR检测结果提示:HepG2/ADM细胞中H19表达量为4.582±0.217,HepG2细胞的相对表达为3.352±0.209,NC组分别为:4.386±0.236、2.950±0.109,低表达组为:0.871±0.143,高表达组为:4.852±0.212,两组相比差异有统计学意义（P<0.001）,转染H19后,高表达组对化疗药5-Fu、ADM、CDDP的IC50分别为25.90±7.01,2.12±0.39,及4.67±1.85,低表达组对各化疗药的IC50分别为19.58±3.01,2.47±0.91,及9.64±1.74,实验组各化疗的IC50值与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）H19逆转耐药机制研究:抑制H19的表达后,流式细胞术检测细胞凋亡结果显示,低表达组细胞凋亡率（20.79±2.22）%,高于阴性对照组（4.16±0.23）%,细胞凋亡率从低到高顺序为空白对照组<阴性对照组<低表达祖,统计学分析显示,低表达组与空白组及阴性组两组间比较差异有统计学意义（F=165.425,P<0.001）,进一步行LSD相互比较差异均有统计学意义（P<0.01）。Western blot结果显示,低表达组ZEB1蛋白表达水平下降,EC蛋白表达有所增强（P<0.05）,而高表达组的表达结果均与低表达组相反,且ZEB1蛋白表达高于对照组,EC蛋白低于对照组（P<0.05）。（3）Western blot结果显示P-gp、ZEB1蛋白在耐药细胞HepG2/ADM中较亲本细胞HepG2表达量高（P<0.05）。（4）qPCR结果显示,在HepG2/ADM+OMT组中H19相对表达量与HepG2/ADM组的对比无明显变化,为4.713±0.391差异无统计学意义（P=0.550）。Western blot结果显示,苦参素作用后HepG2/ADM+OMT组P-gp、ZEB1蛋白表达均降低,EC蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论:1.在肝癌耐药细胞HepG2/ADM及亲本细胞HepG2中H19的表达存在差异,HepG2/ADM细胞中H19的表达水平明显高于HepG2细胞;其表达的变化可调控肿瘤细胞化疗耐药性的改变。2.在HepG2/ADM及HepG2中,下调H19的表达,能抑制EMT作用,促进肝癌细胞的凋亡提高化疗的敏感性。3.在HepG2/ADM及HepG2中,H19可作用于P-gp、ZEB1、EC,通过EMT作用调控肝癌细胞的化疗耐药性。4.苦参素可部分逆转肝癌细胞对化疗药的多药耐药性,其机制不是通过作用于H19发生,可能是通过影响ZEB1及EC表达进而削弱上皮间质转化作用,抑制P-gp的表达而逆转肝癌细胞中化疗耐药性。
二、人肝癌多药耐药细胞模型的建立（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人肝癌多药耐药细胞模型的建立（论文提纲范文）
（1）基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移及自噬影响体外研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞株及实验动物 |
| 1.2 实验药品、样品来源及其制备 |
| 1.3 试剂和溶液 |
| 1.4 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肿瘤细胞培养 |
| 2.2 试验试剂配制 |
| 2.3 试验分组 |
| 2.4 AMPK生物信息学分析 |
| 2.5 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中AMPK的影响 |
| 2.6 AMPK激活剂AICAR作用时间及浓度测定 |
| 2.7 划痕试验检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移的影响7 |
| 2.8 RT-qPCR法检测美洲大蠊多肽PAE_2对侵袭转移相关mRNA的影响 |
| 2.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对侵袭转移相关mRNA的影响 |
| 2.8.2 侵袭转移相关因子引物验证 |
| 2.9 激光共聚焦显微镜观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中LC3蛋白的影响9 |
| 2.10 免疫细胞化学法检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中P62蛋白的影响10 |
| 2.11 美洲大蠊多肽PAE_2对自噬相关mRNA的影响 |
| 2.11.1 美洲大蠊多肽PAE_2对自噬相关mRNA的影响 |
| 2.11.2 自噬相关因子引物验证 |
| 2.12 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肝癌细胞中AMPK的表达 |
| 3.2 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞内AMPK含量的影响 |
| 3.3 AMPK激活剂AICAR作用时间及作用浓度测定 |
| 3.4 划痕试验检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞划痕愈合率的影响 |
| 3.5 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移相关因子的影响 |
| 3.5.1 RT-PCR检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移相关因子的影响 |
| 3.5.2 RT-PCR检测侵袭转移相关因子引物特异性验证 |
| 3.6 .激光共聚焦观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬的影响(LC3 蛋白的形成).. |
| 3.7 免疫细胞化学法化观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬的影响(P62 蛋白) |
| 3.8 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬相关因子mRNA表达的影响 |
| 3.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬相关因子mRNA表达的影响 |
| 3.8.2 自噬相关因子mRNA引物验证 |
| 第二章 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移及自噬影响体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品、实验试剂 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肿瘤细胞培养 |
| 2.2 试验试剂配制 |
| 2.3 试验分组 |
| 2.4 Balb/c-nude裸鼠皮下移植瘤模型建立 |
| 2.5 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠的影响 |
| 2.6 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠生化指标的影响 |
| 2.7 HE染色法检测美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤组织、肝脏组织病理影响 |
| 2.8 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 2.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 2.8.2 移植瘤裸裸鼠肿瘤组织中侵袭转移相关因子引物验证 |
| 2.9 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭自噬 |
| 2.9.1 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠自噬相关因子mRNA的影响 |
| 2.9.2 移植瘤裸裸鼠肿瘤组织侵袭转移相关因子引物验证 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 裸鼠一般状态观察 |
| 3.2 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠相关脏器的影响 |
| 3.3 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠血清生化指标的影响 |
| 3.4 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤及肝脏组织病理学的影响 |
| 3.5 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 3.5.1 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 3.5.2 侵袭转移相关因子引物验证 |
| 3.6 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子mRNA的影响 |
| 3.6.1 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子mRNA的影响 |
| 3.6.2 裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子验证 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
| 9 附录 |
（2）胰岛素抵抗通过调控HIF-1α促进肝癌细胞多药耐药的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 肝癌的治疗现状 |
| 1.2 胰岛素抵抗 |
| 1.3 HIF-1α |
| 1.4 地高辛 |
| 1.5 本课题研究思路与内容 |
| 1.5.1 研究思路 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.2.1 构建胰岛素抵抗(IR)细胞模型 |
| 1.5.2.2 评判IR对肿瘤细胞功能的影响 |
| 1.5.2.3 HIF-1α的表达及干预 |
| 1.5.2.4 地高辛作为化疗药增敏剂的作用初探 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器、设备 |
| 2.2 实验用溶液配制 |
| 2.2.1 肝癌细胞冻存液的配置 |
| 2.2.2 胰岛素溶液的配置 |
| 2.2.3 MTT溶液配置 |
| 2.2.4 丝裂霉素溶液的配置 |
| 2.2.5 索拉菲尼溶液的配置 |
| 2.2.6 地高辛溶液的配置 |
| 2.2.7 电泳液的配置 |
| 2.2.8 电转液的配置 |
| 2.2.9 TBST的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 胰岛素抵抗细胞模型的诱导 |
| 2.3.3 胰岛素抵抗细胞模型的验证 |
| 2.3.4 细胞功能的变化 |
| 2.3.5 细胞药物耐受性的变化 |
| 2.3.6 胰岛素抵抗诱导HIF-1α蛋白高表达 |
| 2.3.7 地高辛抑制HIF-1α的表达 |
| 2.3.8 地高辛作用化疗药物增敏剂的应用初探 |
| 2.3.9 数据统计 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 胰岛素抵抗肝癌细胞模型的建立 |
| 3.1.1 葡萄糖消耗量降低 |
| 3.1.2 Ins R的表达降低 |
| 3.2 胰岛素抵抗对肝癌细胞功能变化的影响 |
| 3.2.1 胰岛素抵抗促进肝癌细胞增殖能力 |
| 3.2.2 胰岛素抵抗促进肝癌细胞侵袭能力 |
| 3.3 胰岛素抵抗提高肝癌细胞药物耐受性 |
| 3.3.1 胰岛素抵抗提高细胞对化疗药的耐受能力 |
| 3.3.2 胰岛素抵抗降低化疗药诱发的细胞凋亡 |
| 3.4 胰岛素抵抗可促进HIF-1α蛋白的表达 |
| 3.4.1 胰岛素抵抗促进HIF-1α蛋白在m RNA水平上的表达 |
| 3.4.2 胰岛素抵抗促进HIF-1α蛋白在蛋白水平上的表达 |
| 3.5 地高辛特异性抑制HIF-1α蛋白的表达 |
| 3.5.1 地高辛对肝癌细胞的毒性作用 |
| 3.5.2 地高辛可抑制HIF-1α的表达 |
| 3.6 HIF-1α的药理学抑制作用可改善肝癌细胞对化疗药的敏感性 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 胰岛素抵抗通过调控HIF-1α促进肝癌细胞多药耐药的机制研究 |
| 4.2 地高辛作为化疗药物增敏剂的作用初探 |
| 4.3 创新性与不足 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 胰岛素抵抗对肝癌预防与治疗作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
| 附录 中英文缩略词表 |
（3）苦参素抑制MiR-181a表达对人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM裸鼠移植瘤耐药性的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 肿瘤生长情况及裸鼠一般状况 |
| 2.2 病理学结果及HE染色 |
| 2.3 Bim、P-gp 蛋白免疫组化检测结果 |
| 2.4 Bim、P-gp蛋白质印迹法Western Blot检测结果 |
| 2.5 BCL2L11 m RNA、ABCB1 m RNA及 miR-181a实时荧光定量PCR法检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验的创新点和主要发现 |
| 3.2 miR-181a对 HepG2/ADM裸鼠移植瘤ABCB1 m RNA表达及其蛋白P-gp表达的影响 |
| 3.3 苦参素对HepG2/ADM裸鼠移植瘤ABCB1 m RNA表达及其蛋白P-gp表达的影响 |
| 3.4 苦参素与miR-181a联合对HepG2/ADM裸鼠移植瘤ABCB1 m RNA表达及其蛋白P-gp表达的影响 |
| 3.5 苦参素逆转肝癌多药耐药新机制 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 MicroRNA在肝癌发生发展中的作用及其治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（4）美洲大蠊多肽PAE2逆转HepG2/ADM多药耐药性的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第1章 美洲大蠊多肽PAE_2体外逆转HepG2/ADM多药耐药性的作用研究 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞株 |
| 1.1.2 实验药品 |
| 1.1.3 主要试剂与耗材 |
| 1.1.4 主要仪器和设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 细胞复苏 |
| 1.2.3 细胞换液 |
| 1.2.4 细胞传代 |
| 1.2.5 细胞冻存 |
| 1.2.6 溶液的配制 |
| 1.2.7 MTT法测定多肽PAE_2对细胞增殖抑制作用的时效与量效关系 |
| 1.2.8 MTT法检测HepG2和HepG2/ADM细胞的多药耐药性及多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞的逆转作用 |
| 1.2.9 MTT法测定美洲大蠊提取物CⅡ-3、脱脂膏和索拉非尼的细胞毒性,确定逆转耐药剂量 |
| 1.2.10 分组与给药 |
| 1.2.11 激光共聚焦显微镜观察多肽PAE_2对药物累积的影响 |
| 1.2.12 Western blot法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞相关凋亡蛋白的影响 |
| 1.2.13 免疫细胞化学法和RT-qPCR法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞多药耐药相关蛋白的影响 |
| 1.2.14 免疫细胞化学法和RT-qPCR法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞中介导MDR相关酶的影响 |
| 1.2.15 免疫细胞化学法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞中VEGF的影响 |
| 1.2.16 统计学处理 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 多肽PAE_2对细胞增殖抑制作用的时效与量效关系 |
| 1.3.2 MTT法检测HepG2和HepG2/ADM细胞的多药耐药性及多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞的逆转作用 |
| 1.3.3 MTT法测定美洲大蠊提取物CⅡ-3、脱脂膏、索拉非尼的细胞毒性,确定逆转耐药剂量 |
| 1.3.4 激光共聚焦显微镜观察多肽PAE_2对药物累积的影响 |
| 1.3.5 Western blot法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞相关凋亡因子的影响 |
| 1.3.6 免疫细胞化学法和RT-qPCR法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞多药耐药相关蛋白的影响 |
| 1.3.7 免疫细胞化学法和RT-qPCR法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞中酶介导的MDR的影响 |
| 1.3.8 免疫细胞化学法检测多肽PAE_2对HepG2/ADM细胞中VEGF的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第2章 美洲大蠊多肽PAE_2逆转HepG2/ADM裸鼠移植瘤多药耐药性的作用研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验药品 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 药品及试剂的配制 |
| 2.2.2 建立肝癌细胞移植瘤裸鼠模型 |
| 2.2.3 分组与给药 |
| 2.2.4 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤生长及脏器指数的影响 |
| 2.2.5 多肽PAE_2对移植瘤裸小鼠肝肾功能的影响 |
| 2.2.6 多肽PAE_2对移植瘤裸小鼠肿瘤组织凋亡蛋白的影响 |
| 2.2.7 免疫组织化学法和RT-qPCR法检测多肽PAE_2对移植瘤裸小鼠肿瘤组织中多药耐药相关蛋白的影响 |
| 2.2.8 免疫组织化学法和RT-qPCR法检测多肽PAE_2对移植瘤裸小鼠肿瘤组织中介导多药耐药相关酶的影响 |
| 2.2.9 免疫组织化学法检测多肽PAE_2对移植瘤裸小鼠肿瘤组织中VEGF的影响 |
| 2.2.10 HE染色法检测多肽PAE_2对移植瘤裸小鼠肿瘤组织的病理改变 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 移植瘤裸鼠的一般状态观察 |
| 2.3.2 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠相关脏器的影响 |
| 2.3.3 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肝肾功能的影响 |
| 2.3.4 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠的抑瘤作用 |
| 2.3.5 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠相关凋亡蛋白的影响 |
| 2.3.6 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤组织中多药耐药蛋白的影响 |
| 2.3.7 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤组织中介导多药耐药酶的影响 |
| 2.3.8 多肽PAE_2 对移植瘤裸鼠肿瘤组织VEGF的影响 |
| 2.3.9 多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤组织的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
| 附件 |
（5）苯硼酸功能化的智能纳米药物传递系统（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 纳米药物传递系统概述 |
| 1.1.1 纳米药物传递系统简介 |
| 1.1.2 纳米药物传递系统在肿瘤治疗中的研究进展 |
| 1.2 聚合物胶束作为抗肿瘤纳米药物传递系统 |
| 1.2.1 聚合物胶束的结构与特点 |
| 1.2.2 聚合物胶束在体内传递过程中面临的挑战 |
| 1.2.3 多功能聚合物胶束 |
| 1.2.4 聚合物胶束在临床研究中的进展 |
| 1.3 聚乙二醇化在聚合物胶束中的应用 |
| 1.3.1 聚乙二醇化的优势与挑战 |
| 1.3.2 聚乙二醇困境的解决策略 |
| 1.4 苯硼酸在药物传递系统中的应用 |
| 1.4.1 苯硼酸的化学性质 |
| 1.4.2 引入苯硼酸作为配体靶向肿瘤细胞 |
| 1.4.3 引入苯硼酸实现刺激响应性 |
| 1.5 论文研究意义及主要内容 |
| 第二章 以苯硼酸酯为连接单元的两嵌段还原及pH双敏感喜树碱聚合物前药的合成、表征及性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与耗材 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 PEG-BC-PGlu-ss-CPT的合成路线及步骤 |
| 2.2.4 PEG-BC-PGlu-ss-CPT两嵌段聚合物前药的表征 |
| 2.2.5 PEG-BC@PGlu-ss-CPT前药胶束的制备和表征 |
| 2.2.6 PEG-BC-PGlu-ss-CPT临界聚集浓度(CAC)的测定 |
| 2.2.7 聚合物前药胶束的稳定性评价 |
| 2.2.8 聚合物前药和前药胶束的酸降解性 |
| 2.2.9 聚合物前药和前药胶束的还原降解性 |
| 2.2.10 药物释放曲线 |
| 2.2.11 细胞株与细胞培养 |
| 2.2.12 细胞毒性 |
| 2.2.13 细胞摄取效率 |
| 2.2.14 统计分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 PEG-BC-PGlu-ss-CPT两嵌段聚合物前药的合成与表征 |
| 2.3.2 前药胶束的制备及表征 |
| 2.3.3 聚合物前药和前药胶束的酸敏感性 |
| 2.3.4 聚合物前药和前药胶束的还原敏感性 |
| 2.3.5 药物体外释放曲线 |
| 2.3.6 纳米前药胶束的稳定性评价 |
| 2.3.7 细胞摄取效率 |
| 2.3.8 细胞毒性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 以苯硼酸为靶向基团的pH敏感核交联载阿霉素胶束药物的制备、表征及性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂与耗材 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 PBA-PEG-b-P(Glu-co-GluDA)的合成路线及步骤 |
| 3.2.4 聚合物PBA-PEG-b-P(Glu-co-GluDA)的表征 |
| 3.2.5 未交联空胶束(UCLM)和核交联空胶束(CCLM)的制备 |
| 3.2.6 临界聚集浓度(CAC)的测定 |
| 3.2.7 核交联空胶束CCLM的表征 |
| 3.2.8 邻苯二酚和三价铁离子之间的pH响应性配位 |
| 3.2.9 载药胶束的制备 |
| 3.2.10 药物释放曲线 |
| 3.2.11 细胞株与细胞培养 |
| 3.2.12 细胞毒性 |
| 3.2.13 细胞摄取效率 |
| 3.2.14 药物外排测定 |
| 3.2.15 实验动物及饲养 |
| 3.2.16 移植瘤模型和体内抗肿瘤效果研究 |
| 3.2.17 统计分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 PBA-PEG-b-P(Glu-co-GluDA)的合成与表征 |
| 3.3.2 聚合物PBA-PEG-b-P(Glu-co-GluDA)的胶束化和表征 |
| 3.3.3 邻苯二酚和三价铁离子之间的pH响应性配位 |
| 3.3.4 药物包封和药物释放曲线 |
| 3.3.5 PBA介导的细胞摄取和靶向效率 |
| 3.3.6 细胞摄取的定量分析 |
| 3.3.7 细胞毒性 |
| 3.3.8 药物外排测定 |
| 3.3.9 体内抗肿瘤效果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 以苯硼酸为靶向基团的还原敏感核交联喜树碱前药胶束的制备、表征及性能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂与耗材 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 PBA-PEG-P(Glu-co-GlussCPT)的合成路线及步骤 |
| 4.2.4 聚合物PBA-PEG-P(Glu-co-GlussCPT)的表征 |
| 4.2.5 聚合物PBA-PEG-P(Glu-co-GlussCPT)的自组装行为 |
| 4.2.6 PBA修饰的未交联胶束(CPT-UCLM)和PBA修饰的核交联胶束(CPT-CCLM)的制备 |
| 4.2.7 CPT-CCLM的表征 |
| 4.2.8 CPT-CCLM动态交联的必要性 |
| 4.2.9 CPT-CCLM的还原响应降解 |
| 4.2.10 药物释放曲线 |
| 4.2.11 细胞株及细胞培养 |
| 4.2.12 细胞摄取效率 |
| 4.2.13 细胞毒性 |
| 4.2.14 实验动物和移植瘤模型 |
| 4.2.15溶血实验 |
| 4.2.16 体内生物分布研究 |
| 4.2.17 体内抗肿瘤效果 |
| 4.2.18 组织学分析 |
| 4.2.19 统计分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 PBA-PEG-P(Glu-co-GlussCPT)聚合物前药的合成与表征 |
| 4.3.2 PBA修饰的核交联喜树碱前药胶束(CPT-CCLM)的胶束化及表征 |
| 4.3.3 CPT-CCLM的还原响应降解 |
| 4.3.4 药物释放曲线 |
| 4.3.5 细胞摄取效率 |
| 4.3.6 细胞毒性 |
| 4.3.7 体内生物分布研究及抗肿瘤作用 |
| 4.3.8 生物相容性 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 前药胶束共传递喜树碱与阿霉素协同克服乳腺癌细胞多药耐药以及抑制转移的效果评价 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 试剂与耗材 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.2.3 胶束的制备 |
| 5.2.4 共传递胶束的表征及稳定性 |
| 5.2.5 共传递胶束的体外药物释放 |
| 5.2.6 细胞株与细胞培养 |
| 5.2.7 细胞摄取效率 |
| 5.2.8药物外排实验 |
| 5.2.9 共传递胶束的细胞毒性 |
| 5.2.10 药物联合指数计算 |
| 5.2.11 创伤愈合实验效果评价 |
| 5.2.12 Transwell实验效果评价 |
| 5.2.13 统计分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 双药比例的筛选 |
| 5.3.2 共传递胶束的制备和表征 |
| 5.3.3 共传递胶束的体外药物释放 |
| 5.3.4 细胞摄取效率 |
| 5.3.5 共传递胶束减少药物外排评价 |
| 5.3.6 细胞毒性与协同作用评价 |
| 5.3.7 创伤愈合实验效果评价 |
| 5.3.8 Transwell实验效果评价 |
| 5.4 本章小结 |
| 论文总结与展望 |
| 论文总结 |
| 论文的创新点、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ:缩写词对照表 |
| 附录Ⅱ:动物实验伦理审查表 |
| 作者在学期间所获得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）阿帕替尼抑制人肝癌细胞侵袭、转移和多药耐药性的作用及机制探讨（论文提纲范文）
| 前言 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 阿帕替尼通过调节NF-κB信号通路下调MMP相关蛋白表达,从而抑制肝癌细胞的侵袭和转移 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 仪器与设备 |
| 2.2 试验与抗体 |
| 2.3 细胞与细胞培养 |
| 2.4 检测阿帕替尼对人肝癌细胞侵袭和转移的影响 |
| 2.4.1 划痕实验 |
| 2.4.2 Transwell侵袭实验 |
| 2.4.3 实时定量逆转录PCR(q RT-PCR) |
| 2.4.4 蛋白免疫印迹(Western blot)分析 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 阿帕替尼抑制人肝癌细胞HepG2,Hep3B,Huh7和SMMC-7721的迁移能力 |
| 3.2 阿帕替尼抑制人肝癌细胞HepG2,Hep3B,Huh7和SMMC-7721的侵袭转移能力 |
| 3.3 阿帕替尼可下调HepG2和Hep3B肝癌细胞中MMP家族基因的表达水平 |
| 3.4 阿帕替尼对MMPS表达的调控作用与TIMP-3和TIMP-4 表达的上调有关 |
| 3.5 阿帕替尼能够抑制NF-κB信号通路的激活 |
| 4 讨论 |
| 5 实验小结 |
| 第二部分 阿帕替尼在体内及体外实验中通过调节 NF-κB信号通路下调 MDR 相关蛋白表达,从而逆转肝癌细胞对化疗药物的多药耐药性 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试剂与抗体 |
| 2.2 细胞与细胞培养 |
| 2.3 阿帕替尼在细胞水平对肝癌细胞多药耐药性的影响研究 |
| 2.3.1 建立Hep3B/5-Fu人肝癌细胞多药耐药系 |
| 2.3.2 细胞增殖实验(CCK-8)分析Hep3B/5-Fu细胞的药物敏感性 |
| 2.3.3 CCK-8 实验检测阿帕替尼对Hep3B/5-Fu细胞多药耐药性的影响 |
| 2.3.4 流式细胞仪检测Hep3B/5-Fu的凋亡率 |
| 2.3.5 NF-κBp65特异性SiRNA转染多药耐药细胞系 |
| 2.3.6 检测阿帕替尼处理后MDR和NF-κB通路相关基因表达的变化 |
| 2.4 在体试验研究阿帕替尼对人肝癌细胞多药耐药性的影响 |
| 2.4.1 建立裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型 |
| 2.4.2 qRT-PCR和Western blot法检测肿瘤组织中多药耐药相关基因的表达变化 |
| 2.4.3 免疫组织化学染色法分析多药耐药基因的表达变化 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 阿帕替尼在体外细胞实验中抑制肝癌细胞MDR相关基因的表达 |
| 3.1.1 Hep3B/5-Fu人肝癌多药耐药细胞系中MDR相关基因过表达 |
| 3.1.2 Hep3B/5-Fu细胞对化疗药物敏感性降低 |
| 3.1.3 阿帕替尼可逆转多药耐药细胞的耐药性 |
| 3.1.4 阿帕替尼促进Hep3B/5-Fu细胞的凋亡 |
| 3.1.5 转染NF-κBp65siRNA的Hep3B/5-Fu细胞中P-gp和LRP的表达下调 |
| 3.1.6 阿帕替尼下调MDR和NF-κB信号通路相关基因的表达 |
| 3.2 阿帕替尼在体内动物实验中抑制MDR相关的基因表达 |
| 3.2.1 阿帕替尼治疗可抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生长 |
| 3.2.2 阿帕替尼治疗可下调裸鼠皮下肝癌移植瘤中MDR相关基因的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 实验小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 抗血管生成靶向药物在原发性肝癌治疗中的研究现状和进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件1 攻读学位期间发表论文目录 |
| 附件2 英文缩略词一览表 |
（7）狼毒大戟提取物逆转乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR对阿霉素耐药的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤多药耐药性机制及中药逆转肿瘤多药耐药的概述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（8）赤芍总苷抗肝肿瘤药效物质分析及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 赤芍本草考证及赤芍研究进展 |
| 第一节 赤芍本草考证 |
| 第二节 赤芍化学成分和药理作用的研究进展 |
| 第三节 赤芍总苷抗肝癌疗效研究 |
| 第二章 赤芍总苷的提取纯化及化学成分表征研究 |
| 第一节 赤芍总苷提取工艺研究 |
| 第二节 赤芍总苷纯化工艺研究 |
| 第三节 赤芍、赤芍总苷抗肝肿瘤作用比较研究 |
| 第四节 基于液质联用技术赤芍总苷化学成分表征研究 |
| 第五节 基于分子网络的赤芍总苷化学成分可视化分析 |
| 第六节 小结 |
| 第三章 赤芍总苷体内、外抗肝肿瘤药效学研究 |
| 第一节 赤芍总苷体外抗肝肿瘤作用研究 |
| 第二节 赤芍总苷体内抗肝肿瘤作用研究 |
| 第三节 赤芍总苷对H22荷瘤小鼠血清细胞因子的影响 |
| 第四节 小结 |
| 第四章 赤芍总苷作用机制初步研究 |
| 第一节 基于网络药理学的赤芍总苷抗肝癌分子机制研究 |
| 第二节 赤芍总苷对人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响 |
| 第三节 赤芍总苷介导PI3K/Akt信号通路抗肝肿瘤作用研究 |
| 第四节 赤芍总苷介导MEK/ERK信号通路抗肝肿瘤作用研究 |
| 第五节 小结 |
| 第五章 赤芍总苷对大鼠细胞色素P450酶的影响及肝毒性评价 |
| 第一节 细胞色素P450酶的研究概况 |
| 第二节 赤芍总苷对大鼠P450酶亚型的活性影响 |
| 第三节 赤芍总苷对大鼠P450酶亚型mRNA表达的影响 |
| 第四节 赤芍总苷对大鼠血清细胞因子的影响 |
| 第五节 小结 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 赤芍总苷药理作用的研究进展 |
| 中药抗肿瘤作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（9）苦参素通过下调ABCG2表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 成瘤情况及裸鼠一般情况 |
| 2.2 HE染色结果对比 |
| 2.3 RT-qPCR法检测ABCG2的mRNA的表达 |
| 2.4 免疫组化结果比较 |
| 2.5 ELISA 检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 乳腺癌耐药蛋白在消化道肿瘤中的作用研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（10）LncRNA H19影响肝癌细胞HepG2/ADM的多药耐药性及苦参素逆转肝癌耐药作用新机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 细胞系 |
| 主要试剂及耗材 |
| 主要仪器设备 |
| 基因数据库 |
| 主要的药物配制 |
| 第一部分 H19 在人肝癌细胞HepG2及HepG2/ADM中的表达差异及其与化疗敏感性关系研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞复苏 |
| 2.2 慢病毒转染人肝癌耐阿霉素HepG2/ADM细胞及稳定转染细胞株筛选 |
| 2.3 实时荧光定量PCR检测H19 表达 |
| 2.4 药物敏感性检测 |
| 2.5 数据统计与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 H19 在两株细胞中的差异 |
| 3.2 验证H19 转染效率的情况 |
| 3.3 转染后药物敏感性检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 原发性肝癌的治疗现状 |
| 4.2 H19 与化疗耐药性的关系 |
| 4.3 H19 与肝癌耐药细胞HepG2/ADM多药耐药的关系 |
| 5 结论 |
| 第二部分 H19 参与调控HepG2及HepG2/ADM细胞化疗药物敏感性的分子机制研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 细胞凋亡检测 |
| 2.3 细胞总蛋白的提取 |
| 2.4 Western blot检测转染前后P-gp、ZEB1及EC的表达 |
| 2.5 数据统计与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞凋亡检测 |
| 3.2 Western blot检测P-gp、ZEB1及EC的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 苦参素逆转人肝癌细胞多药耐药新机制研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 qPCR检测苦参素作用后H19 表达 |
| 2.3 H19 提取、检测方法 |
| 2.4 Western blot法检测苦参素作用后P-gp、ZEB1、EC的表达 |
| 2.5 数据统计部分 |
| 3 结果 |
| 3.1 qPCR法检测苦参素作用后H19 表达 |
| 3.2 苦参素作用后P-gp、ZEB1及EC的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 不足与展望 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读硕士学位期间获得的科研成果 |
四、人肝癌多药耐药细胞模型的建立（论文参考文献）
- [1]基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究[D]. 李彩琳. 大理大学, 2021(09)
- [2]胰岛素抵抗通过调控HIF-1α促进肝癌细胞多药耐药的机制研究[D]. 马莉. 兰州大学, 2021(11)
- [3]苦参素抑制MiR-181a表达对人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM裸鼠移植瘤耐药性的影响及相关机制研究[D]. 廖俊. 右江民族医学院, 2020
- [4]美洲大蠊多肽PAE2逆转HepG2/ADM多药耐药性的作用及机制研究[D]. 吕鸿. 大理大学, 2020(05)
- [5]苯硼酸功能化的智能纳米药物传递系统[D]. 黄钰淑. 华东师范大学, 2020(08)
- [6]阿帕替尼抑制人肝癌细胞侵袭、转移和多药耐药性的作用及机制探讨[D]. 何晓晓. 华中科技大学, 2020
- [7]狼毒大戟提取物逆转乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR对阿霉素耐药的实验研究[D]. 李晶晶. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [8]赤芍总苷抗肝肿瘤药效物质分析及作用机制研究[D]. 范冰冰. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [9]苦参素通过下调ABCG2表达影响阿霉素抗人肝癌耐药裸鼠移植瘤的作用[D]. 邓凤莲. 右江民族医学院, 2019(01)
- [10]LncRNA H19影响肝癌细胞HepG2/ADM的多药耐药性及苦参素逆转肝癌耐药作用新机制研究[D]. 黎梨. 右江民族医学院, 2019(01)