一、日本发现有两种不同型的犬瘟热（论文文献综述）
王召阳[1]（2020）在《犬瘟热病毒流行毒株序列分析及纳米抗体噬菌体库的构建与筛选》文中进行了进一步梳理犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）引起的一种急性且高度传染性的传染病。CD的发生率很高,致死率高达50%,严重影响了犬类繁殖和毛皮动物繁殖的发展。因此,本研究收集济南地区疑似感染CD的临床样本,扩增CDV H基因并进行遗传差异分析。同时,用CDV免疫羊驼,构建犬瘟热病毒特异性纳米抗体噬菌体文库,并进行犬瘟热的纳米抗体的筛选和表达。实验1:济南犬瘟热病毒H基因的克隆及遗传进化分析为了调查济南宠物犬瘟热的感染状况,于2019年1月至2019年6月在济南一家宠物医院随机收集了56例怀疑感染CDV的临床拭子样本,通过RT-PCR方法扩增了CDV H基因的全长序列,经测序后分析了H基因序列的遗传变异。结果显示,RT-PCR共检测到7个阳性样品。H基因核苷酸同源性为98.7%-99.9%,氨基酸同源性为98.7%-100%。与疫苗株相比,差异很大。与疫苗株相比,同源性为90.0%-90.9%,氨基酸同源性为88.8%-91.4%。遗传进化表明,这7个菌株均为中国目前所有的亚洲Ⅰ型菌株,与北京毒株（BJ17BC1）及黑龙江毒株（HRB-E8和HLJ-1-14）相似。与广东株（GD1811和GD1810）形成一个大的分散分支。H基因的氨基酸基因分析表明,与参考菌株相比,7个毒株变异程度不同。糖基化位点分析显示,除了SD-07包含8个潜在的天冬酰胺糖基化位点外,其余6个菌株均为9个潜在的天冬酰胺糖基化位点,而这6个菌株均包含野生株。唯一的g3（309）糖基化位点与疫苗株有很大差异,但与亚洲Ⅰ野生株高度一致。H基因抗原的预测分析显示7种野生病毒株与疫苗株有显着差异。研究表明,济南流行的CDV主要是亚洲Ⅰ型。这7个野毒株与疫苗株有很大的遗传差异,并且不同株之间存在遗传多样性。实验2:CDV特异性抗体的噬菌体文库的构建和鉴定为了获得CDV特异性抗体噬菌体文库,首先使用超纯化的CDV,然后使用纯化的CDV免疫羊驼,使用巢式PCR扩增纳米抗体（Nanobodies,Nbs）序列,构建CDV特异性抗体噬菌体文库,然后选择40个单克隆,计算阳性克隆的数量,随机选择13个序列进行序列验证,并计算存储容量并分析文库多样性。结果表明,第四次免疫后,血清抗体滴度可达1:25,000,符合文库建设的要求。巢式PCR扩增了一个400 bp的条带,与预期的Nbs大小一致。噬菌体展示文库的文库容量确定为3.41×109 PFU,阳性率为90%。测序结果表明,选择的13个VHH片段的序列不同,其中互补性决定了3区（CDR3）的最佳多样性。以上结果表明该研究成功构建了CDV特异性抗体噬菌体文库。该文库容量大,多样性丰富,阳性率高,为后续的纳米抗体表达奠定了基础。实验3:犬瘟热特异性纳米抗体的筛选和表达将纯化的CDV包被在ELISA板上,并对CDV特异性抗体噬菌体文库进行三轮淘选以富集特异性结合CDV的噬菌体。选择单克隆,并使用噬菌体-ELISA鉴定和选择具有高结合能力的噬菌体。通过巴斯德毕赤酵母表达系统表达和纯化该基因序列,并通过ELISA和IFA鉴定其结合力。结果表明,经过三轮淘选,总共富集了85个阳性克隆,阳性率为88.5%（85/96）;酵母表达系统用于表达两个纳米抗体。WB鉴定结果表明,在15 kDa处有明显的条带。ELISA和IFA鉴定实验中表达的两种纳米抗体均可特异性结合CDV。上述结果表明该研究成功地筛选并表达了两种与CDV特异性结合的纳米抗体菌株。综上,本研究初步分析了济南地区当前CDV流行株的遗传差异,对有针对性的有效CD防治措施具有指导意义。成功构建了CDV特异性抗体噬菌体文库,表达纯化了2株特异性结合CDV的纳米抗体,为后期建立犬瘟热诊断方法和筛选具有中和活性的纳米抗体提供了实验基础。
赵国清[2]（2019）在《威海地区主要毛皮动物常见病原体检测及微生态防治》文中研究说明水貂、狐狸、貉子是具有较高利用价值的毛皮动物。威海市毛皮动物养殖量位居全国地级市前列。本实验主要对威海地区的水貂、狐狸、貉子感染犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒及常发细菌病等进行了病原体检测,提出了微生态防控措施。1.对威海区域内毛皮动物养殖场,通过查阅档案、实地走访和填写调查问卷相结合的方法进行调查,掌握养殖、防疫、免疫以及主要疫病存在情况。结果表明,毛皮动物存栏量下降较大,存栏500只以上养殖场饲养量所占比重,水貂、狐狸比重约为50%,貉子比重约为20%。导致毛皮动物发病的病毒性病原主要是犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、伪狂犬病毒、狐狸脑炎病毒等;细菌性病原主要是绿脓杆菌、沙门菌、巴氏杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、魏氏梭菌等细菌。2.对存栏5000只以上的毛皮动物养殖场随机采集病料,共采集140份样品（分别采集肝、肺、肾、脾、肠、脑）。对样本分别进行病理解剖、病毒检测、细菌检测。结果显示,犬瘟热病毒的感染率约27.14%,细小病毒的感染率为20.71%,阿留申病毒未检出,大肠杆菌的感染率为21.42%,克雷伯氏菌的感染率为15%,沙门氏菌的感染率为10.71%,支气管败血波氏杆菌的感染率为2.14%,绿脓杆菌的感染率为11.42%。犬瘟热病毒、细小病毒、大肠杆菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、支气管败血波氏杆菌、绿脓杆菌7种病原的单纯感染、二重感染、三重感染的感染率分别为30%、30.71%、5.71%。水貂的致病菌感染率比狐狸、貉子更高。3.血清学分型结果显示:大肠杆菌O88是主要的流行血清型,占检出血清型的33.3%;G型绿脓杆菌是主要流行菌株,占检出血清型的35.7%。药敏试验结果显示,感染性细菌对氨苄西林等青霉素类、头孢唑林等一、二代头孢菌素、复方新诺明、呋喃妥英等的耐药率较高;比较敏感的药物有:头孢他啶、头孢吡肟等三、四代头孢菌素,妥布霉素,左氧氟沙星,哌拉西林/他唑巴坦等含有β-内酰胺酶抑制剂的药物。4.对分离到的CDV和MEV株的基因进行了测序,分离到的2株CDV的核苷酸同源性为99.8%,与6株参考毒株的核苷酸同源性为98.1%99.1%,分离到的病毒同属于Asia-I型;分离到的3株MEV的核苷酸同源性为99.7%100%,3株毒株基因与28株参考毒株的基因同源性为97.3%99.1%,分离的细小病毒与CPV位于同一进化分支上。5.为了研究饲料中添加益生菌制剂对水貂免疫功能的影响。试验采用单因素完全随机设计试验,选择60日龄雄性水貂随机分为4组,每组3个重复,每个重复5只,Ⅰ组为空白对照组饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%、1.5%益生菌制剂,试验期60 d,试验结束测定其免疫指标。结果表明,在基础饲料中添加益生菌制剂可以提高水貂的免疫功能。本调查揭示了威海地区主要毛皮动物感染性疾病的主要病原及其特性,找出了致病原的多重感染的发病规律,阐明了主要细菌病的病原耐药性,为威海地区毛皮动物疾病的诊断与防治提供了基础。
赵雨馨[3]（2019）在《沈阳地区宠物犬猫主要传染病流行特点及犬细小病毒的遗传进化分析》文中研究说明近年来,随着国民经济和城市化进程的迅速发展,宠物犬猫的饲养量不断增长,宠物的生活质量和健康情况也受到了更高的关注,但有关宠物流行病的相关研究却相对滞后。本研究通过调查沈阳地区宠物医院常见的传染病和寄生虫病的发病量,统计分析发现真菌病、细菌病、寄生虫病和病毒病的月平均发病量和月平均气温呈显着相关（P<0.001）,并有两个月的时滞效应。并且利用这四种类型疾病2013至2017年的月平均发病量数据进行时间序列分析,建立了ARIMA模型。本研究中的流行病学统计分析表明,沈阳地区宠物医院接诊量最高的传染病为犬细小病毒病。犬细小病毒传播范围广、感染性强,对我国宠物犬、军犬警犬及野生动物和经济动物都造成严重的危害。本研究采用分子生物学方法从遗传进化方面对沈阳地区犬细小病毒进行了研究和探讨。9份沈阳地区犬细小病毒的唾液、血液和粪便样本收集于2017～2018年,通过提取的VP2基因和NS1基因进行PCR克隆测序,得到沈阳地区犬细小病毒的基因序列,分析其氨基酸位点突变情况,进行同源性比对及系统发育树构建。结果表明通过测序得到的五条序列全部为CPV-2c型;亲缘关系与亚型和地区有关,与北京地区、吉林地区分离到的毒株序列较近,而与意大利、日本国家的序列相对较远。VP2序列中有10个核苷酸突变（nt14、16、520、817、819、1016、1042、1109、1278及1490）导致9个氨基酸的突变（aa5、6、174、273、339、348、370、426、497）。测得的6条NS1序列与7条标准毒株序列进行比对,发现其中有27个核苷酸突变（nt67、178、196、206、210、336、433、555、616、726、905、969、1017、1059、1207、1267、1463、1488、1558、1625、1664、1715、1728、1736、1792、1891、1953）导致12个氨基酸的突变（aa23、60、66、69、145、206、302、403、423、460、520、555）。沈阳地区的犬细小病毒和其他地区相比,进化速率没有显着差异,共发现12个位点存在正选择。这些突变可能是导致病毒变异的原因,新发现的突变位点也为以后的研究提供了参考。
姜贺[4]（2019）在《犬瘟热病毒N蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备》文中认为犬瘟热（Canine Distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种多种属动物的高度接触性传染病,患病动物通常表现为双相热、胃肠道与呼吸道损害,严重的会发展至神经症状甚至死亡。CDV的感染对不同年龄不同种属动物的致死率不同,其中对未免疫疫苗的家养宠物幼犬致死率高达80%,对于家养犬科宠物如宠物犬、貂或经济动物雪貂,以及其他野生动物如大熊猫、虎等构成严重威胁。然而在实验研究中,了解CDV感染的方法主要依赖于细胞病变的观察,具有主观性的缺点。目前在国内市场上尚缺少一种直接免疫荧光的方法来鉴定细胞水平上CDV感染的方法,而向国外购买荧光抗体价格高昂。因此,本研究目的在于获得CDV N蛋白抗原,并制备单克隆抗体,为建立CDV的直接荧光免疫方法奠定基础。本研究利用引物通过RT-PCR的方法从CDV毒株中扩增N结构蛋白全长的目的片段,通过酶切连接的方法将其连接至原核表达载体质粒p ET-22b（+）构建了p ET-22b-CDVN原核表达质粒;经测序验证CDV N基因正确插入表达质粒且未发生突变后,利用适当浓度IPTG对其在大肠杆菌Rosetta（DE3）中诱导表达以获得N结构蛋白;大批量诱导所得融合蛋白N后经过蛋白纯化柱纯化及复性操作后,与弗式完全佐剂混合乳化后作为免疫原,免疫六周龄的雌性BALB/c小鼠,从小鼠脾脏收集活化的B淋巴细胞,与小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0体外融合,通过程序化的筛选以及亚克隆,获得稳定分泌抗CDV N蛋白为抗原的杂交瘤细胞株系CDVN-SP2/0。将CDVN-SP2/0体外培养扩增,计数后注射入经弗式不完全佐剂处理后七天的六周龄雌性BALB/c小鼠腹腔,小鼠腹部膨大后收获腹水,即为抗CDV N蛋白的单克隆抗体。本研究克隆了CDV的N基因,在大肠杆菌中表达获得了CDV N的结构蛋白,制备了抗该蛋白的单克隆抗体。该抗体的制备,有助于CDV病毒的检测方法的建立。
毕津豪[5]（2019）在《犬瘟热弱毒疫苗耐热冻干保护剂的研究》文中提出生物制品的效力易受温度影响,在储存及运输过程中需保持低温。而依托高成本的冷链运输一直是疫苗配送所面临的巨大问题,若无法将疫苗有效保存,可带来免疫失败等巨大经济损失。根据我国2001版《兽用生物制品质量标准》,冻干活毒疫苗在2-8℃有效保存期多为3-9个月。有限的保存期限制了疫苗的持续效力,同时也为我国无法提供良好保存条件的偏远地区带来诸多不便。生物制品的稳定保存主要依赖于保护剂的添加。目前我国传统冻干保护剂配方多为明胶、蔗糖、乳糖、脱脂乳等基础成分,但是它们大都存在配方简单,保护功能差等诸多问题。因此开发新型活病毒保护剂,对解决传统配方稳定性差,延长疫苗的持续效力具有重要意义。犬瘟热（Canine distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种高度接触性动物传染病,病死率高达80%以上,是当前威胁宠物健康,毛皮经济动物饲养及野生动物保护业的重要疫病之一。目前主要通过疫苗接种预防CD,其中CD疫苗使用的Ondersteport株多为Vero细胞适应株,是较为成熟的标准弱毒疫苗株,是目前常见的商品化疫苗所用毒株,其体外培养存在滴度低且无眼观细胞病变等问题。同时CDV为单股负链RNA病毒,对温度及外界环境十分敏感,不易长期有效保存。基于以上问题,研发一种耐热冻干保护剂为CDV疫苗的稳定保存提供物质基础具有重要意义。第一部分:犬瘟热病毒（Ondersteport株）培养条件优化首先比较不同接毒量对CDV滴度的影响,设置感染复数（Multiplicity of infection,MOI）为0.5,0.1,0.01和1%,2%的接毒量接种Vero细胞后检测病毒滴度;选取1%,2%接毒量接种Vero细胞,绘制1至5d的生长动力学曲线;分别比较冻融及超声波破碎两种收毒方法,对CDV滴度的影响;利用各组实验的最佳条件建立基础种子批毒。结果表明,2%接毒量所收获病毒液滴度最高可达106.38 TCID50/mL。病毒生长曲线表明,接毒后第4天CDV滴度达到最高点为106.681.681 TCID50/mL。传统冻融收毒方法优于超声波破碎方法,其滴度高达107.38 TCID50/mL。扩大培养所建三批基础种子毒,无菌检验及支原体检测合格,为后续耐热冻干保护剂的筛选及优化提供物质基础。第二部分:犬瘟热弱毒疫苗耐热冻干保护剂的筛选及进一步优化基于各类成分的保护机制,根据耐热冻干保护剂的基本构成原则,分别设计A1、B2、C3、D4四种配方;利用耐老化实验37℃保存7d,筛选出最优基础配方;利用Plackett-Burman试验（简称PB试验）确定最优基础配方中各成分含量影响病毒存活率的显着性;建立回归分析,利用软件Minitab 18确定最大响应值下各成分的最优组合并进行冻干验证。结果表明,经耐老化实验后,C3配方病毒存活率最高可达72.82%;PB试验（N=12）模型不显着,最大响应值为97.12%;病毒经最优配方冻干后滴度可达106.335 TCID50/mL。综上所述,本研究成功筛选出一种适用于CDV（Ondersteport株）的耐热冻干保护剂,可为今后CDV疫苗的研发及保存提供参考。
王昊宁[6]（2019）在《犬瘟热时空动力学及黑龙江省东部地区犬瘟热风险预测》文中提出犬瘟热（Canine distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）所引起的多宿主、高发性、接触性及致死性传染病,全世界范围内均有分布。该病的发病率高,传染性强,更易继发其他病毒、细菌的二次感染,继发感染死亡率高达80%。犬科动物是犬瘟热的主要宿主,犬瘟热很容易通过许多犬科动物,例如狗和狐狸等的携带传播,引发大规模的犬瘟热疫情。黑龙江省东部地区河流众多,水量充沛,植被覆盖率高,是野生动物良好的繁育和栖息的场所,具有丰富的野生动物资源。犬瘟热疫情的流行对当地野生动物种群健康造成巨大威胁。为了系统的了解犬瘟热在该地区的生物安全风险,本研究首先通过MaxEnt模型探究犬瘟热在黑龙江省东部地区的高发区域分布及各类环境因子与犬瘟热爆发之间的关系,寻找影响犬瘟热爆发的环境因素;其次通过对犬瘟热病毒进行时空动力学研究,总结分析犬瘟热的传播规律及进化特点;最后,结合野生动物精液病原监测方法于2018年分别在黑龙江省东部地区的各地市对狐狸精液进行随机采样,通过病毒宏基因组分析技术评估该地区犬瘟热流行的风险,验证前期风险评估的可靠性,为该地区犬瘟热的预防和控制提供理论和依据。主要研究结果如下:1.黑龙江省东部地区影响犬瘟热易感野生动物分布的主要环境因素为,昼夜温差与年温差比值（bio3,贡献率60.1%）、11月最高温（tmax11,贡献率21.8%）和11月降水量（pre11,贡献率18.1%）,其中以bio3对其分布影响最大。CDV易感野生动物分布概率自东向西、自北向南逐步降低,以佳木斯东部地区分布概率为最高;2.黑龙江省东部地区影响犬瘟热分布的主要环境因素为,最热月份最高温（bio5,贡献率58.3%）、1月降水量（prec1,贡献率28.8%）和8月最高温（tmax8,贡献率12.9%）,其中以bio5对其分布影响最大。犬瘟热分布概率自西向东、自南向北逐步降低,其中以牡丹江地区分布概率最高;3.通过将黑龙江省东部地区易感野生动物适宜分布图和黑龙江省东部地区犬瘟热分布风险图进行叠加,获得黑龙江省东部地区犬瘟热分布数据,其中高风险分布区域位于黑龙江省东部的中部区域;4.全球犬瘟热贝叶斯系统发生生物地理学分析表明,美国是犬瘟热的起源地,并于1933年扩散到欧洲;犬瘟热病毒向中国扩散的两个渠道为欧洲-中国和美国-中国;利用该技术对中国犬瘟热病毒2种主要基因型（1型和11型）的扩散进行分析表明,贵州是中国犬瘟热病毒（1型）的起源地,于1964年传至北京,随后又开始了在全国范围内的进一步扩散。宿主间传播概率分析表明,犬科动物是犬瘟热的主要传染源;5.依据前述犬瘟热风险分布数据,将研究区域划分为高风险和低风险两个不同风险区域,分别利用养殖狐狸精液构建高风险文库和低风险文库,通过Miseq高通量测序和生物信息学技术对病毒组成进行分析。结果显示,2个文库中一共包含了 13个科24种真核病毒:小RNA病毒科（52.18%）、Smacoviridae科（18.64%）、细小病毒科（5.56%）、Genomoviridae 科（5.3%）、小双节 RNA 病毒科（4.69%）、圆环病毒科（4.34%）、囊泡病毒科（3.82%）)、痘病毒科（2.3%）、Baculoviridae 科（1.55%）、疱疹病毒科（0.73%）、未分类病毒科（0.4%）、反转录病毒科（0.38%）、指环病毒科（0.12%）。低风险文库（Fox1）和高风险文库（Fox2）的病毒种类组成相似,但是检出的病毒序列数目有较大差异,其中高风险文库检出的病毒序列量是低风险文库的1.58倍。两文库内均未检出犬瘟热病毒,但其他病毒均不同程度检出,说明目标区域当前养殖狐狸的犬瘟热生物安全风险较低,但鉴于犬瘟热继发感染的高致死率,因此目标地区的犬瘟热风险依然较高。
郑颖,范泉水[7]（2018）在《犬瘟热预防生物制剂研究进展》文中研究表明犬瘟热（canine distember,CD）呈世界性分布,且在不同物种间可交叉感染,所以难以完全消灭,对犬瘟热尚无特效的治疗药物和方法,疫苗接种是惟一有效的防制措施。自Puntoni首次用犬瘟热病毒感染犬脑组织的福尔马林灭活苗以来,相继研制出不同类型的犬瘟热病毒灭活苗、麻疹病毒异源苗和犬瘟热病毒弱毒疫苗。防制犬瘟热需要使用安全性、免疫力持久的疫苗,而常规疫苗都在不同程度上存在着
孟璞岩[8]（2018）在《南昌市犬源犬瘟热病毒的检测及其流行病学调查》文中认为本试验从江西省南昌市4家动物医院收集到疑似犬瘟热病毒（CDV）感染的犬,经剖检和病理学分析后对其进行PCR检测,改进SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,研究CDV gN和gH基因的分子特征和进化关系,并对南昌市犬源犬瘟热病（CD）进行流行病学调查。结果如下:1解剖学和病理学分析结果显示,呼吸系统、消化系统多表现为组织黏膜卡他性炎、出血和炎性细胞浸润,免疫系统表现为淋巴细胞减少,神经系统表现为出血和炎性细胞浸润。2成功改进SYBR Green I荧光定量PCR检测CDV方法,用该方法检测CD犬的各组织中病毒的含量,组内和组间对比结果显示:未出现神经症状的犬的胃、肺脏、气管、膀胱和淋巴结的CDV含量较高;出现神经症状的犬的脑部组织中CDV含量较高。3成功扩增出大小为1700bp的gN基因和2020bp的gH基因,亲缘关系比较结果显示JX2016和JX2017株与国内毒株亲缘性较近为亚洲I型,两毒株发生一定变异但与国外毒株亲缘性较远。JX2016株与上海株（KX347928）亲缘关系极近。4流行病学调查结果显示,南昌市犬的CD的发病率为2.83%。中、小型犬发病率显着高于大型犬,6月龄以下的犬感染CDV风险极高,未免疫及未完全免疫的犬易感染CDV,纯种犬发病率显着高于杂种犬,感染主要发生在春、冬季节。结论:CDV可造成犬的多个器官损伤并导致机体免疫缺失,两毒株均为亚洲I株并存在一定变异。
王雅文[9]（2018）在《犬瘟热病毒H蛋白与不同动物SLAM相互作用致细胞融合效率差异的分子机制》文中提出犬瘟热是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种烈性、高度接触性传染病。犬瘟热病毒属于副粘病毒科、麻疹病毒属,是有囊膜的单股负链不分节段的RNA病毒,基因组从3’端到5’端依次编码6个结构蛋白,其中血凝素蛋白（H）和融合蛋白（F）分别与宿主细胞的细胞膜的结合和融合。病毒特异性受体在宿主细胞表面的表达是病毒侵入的首要条件,也是决定病毒组织嗜性和发病机理的重要因素。目前,CDV已知的两种主要细胞受体分别是:信号淋巴细胞激活分子（Signaling Lymphocyte Activation Molecules,SLAM）和细胞粘附分子-4（nectin-4）,这两种受体对CDV吸附侵入到宿主体内起重要作用。SLAM为犬瘟热病毒感染宿主免疫细胞的受体,其与CDV H蛋白识别是病毒致病性的基础。不同动物SLAM可变区（V）氨基酸差异可影响受体与CDV H相互作用,进而可能导致宿主对CDV易感性的不同。我们前期研究结果表明水貂对CDV易感性低于貉,且同一株CDV在表达貉子SLAM受体的BHK细胞上比在表达水貂SLAM受体的细胞所引起的病毒效价高,进一步比对SLAM氨基酸序列结果显示水貂和貉SLAM-V区74和129位氨基酸存在V74I和R129Q突变,我们推测该2个位点氨基酸突变可能改变了CDV H蛋白与SLAM相互作用,并使其诱导的SLAM表达细胞膜融合效率的改变。本研究通过CDV H—SLAM V同源建模,SLAM蛋白74和129位氨基酸定点突变和表达分析及CDV H/F—SLAM细胞融合等实验,分别在三维结构、蛋白表达、H-SLAM相互作用等水平上开展研究。结果表明SLAM蛋白74和129位氨基酸均位于与CDV H作用界面;74、129位的氨基酸突变未明显改变水貂、貉SLAM蛋白的表达水平,SLAM-V74I突变降低了其蛋白表达但未影响其细胞融合能力,根据流式细胞检测结果显示,SLAM-V74I表达比例从95.6%下降至91.1%;水貂SLAM-R129Q突变后显着提高CDV对细胞的融合能力,体现在细胞融合实验中,其平均合胞体数目由23.9上升至32.07;而貉SLAM-Q129R突变则显着降低CDV对细胞的融合能力,其平均合胞体数目由19.4下降至15.8。该结果初步验证了我们的猜想,证实了水貂、貉74及129位氨基酸对细胞融合效率的影响。其次,本研究以BHK-21细胞为亲本细胞,将pDisplay-mSLAM转染到细胞中,通过G418压力筛选并结合有限稀释法成功构建出稳定表达水貂SLAM的单克隆细胞系BMS,并利用细胞免疫荧光和RT-PCR技术对该细胞的稳定性进行鉴定,最终成功应用BMS细胞从疑似犬瘟热的水貂脏器中分离1株CDV野毒株,命名为ZCM（17）2。
罗杰[10]（2018）在《H3N2亚型犬流感病毒GEL01佐剂灭活疫苗的研制》文中研究表明犬流感（Canine influenza,CI）是由正粘病毒科A型流感病毒属的犬流感病毒（Canine influenza virus,CIV）引起的一种犬属动物接触性呼吸道传染病。患病犬主要临床症状表现为发热、流涕、咳嗽、喷嚏、精神沉郁、食欲减退等。犬在全球饲养数量已达到40亿,我国约有宠物犬1.5亿只,作为人类最重要的伴侣动物之一,极有可能成为流感病毒传播给人类的中间宿主。目前国内外已经发现了H1、H3、H5和H9等亚型流感病毒能够感染犬,H3N2亚型CIV是目前主要的流行毒株。自从2006年第一次在中国发现H3N2 CIV以来,该病毒都只在亚洲流行,然而,2015年该病毒传播到了美国。但是关于CIV的疫苗目前只有美国批准上市的H3N8和H3N2亚型CIV疫苗,韩国也只是研制了未上市的H3N2亚型CIV疫苗。中国到目前还没有关于H3N2亚型CIV有效的疫苗研究,因此,研制H3N2亚型CI疫苗对犬流感病毒的防控具有重大意义。本研究采用2014年冬天在临床分离的4株CIV毒株A/canine/Guangdong/01/2014（H3N2）（GD1401）,A/canine/Guangdong/02/2014（H3N2）（GD1402）,A/canine/Guangdong/03/2014（H3N2）（GD1403）和A/canine/Guangdong/04/2014（H3N2）（GD1404）,分别接种SPF鸡胚进行传代培养,结果显示在传到第8代时,只有GD1404株的血凝效价稳定在2728。HA、NA基因序列分析与原毒同源性分别为100%,可确定为疫苗候选毒株。并将其作为种毒F1在SPF鸡胚中进行传代,建立了病毒种子批。将种毒库中F5代种毒用于疫苗研究的攻毒模型的建立,感染10周龄健康比格犬,建立了有效的临床症状评分标准,确定了攻毒途径为滴鼻攻毒,最小攻毒剂量为103鸡胚半数感染量(EID50)。通过三种不同灭活剂:甲醛、二乙烯亚胺（BEI）和β-丙内酯（BPL）,在4℃8℃,100 rpm摇床上,对疫苗毒株在不同浓度和不同时间进行灭活,从灭活程度以及灭活前后的血凝效价得出最优化的灭活工艺条件是:用BPL灭活剂在终浓度为0.025%灭活48 h。将GD1404毒株灭活后与GEL01佐剂按92:8混合制备灭活疫苗,对十周龄比格犬进行动物安全性试验以及攻毒保护试验。试验表明,该灭活疫苗对犬安全且有效。在一免后第7天测得HI抗体为1:40,在二免后攻毒第14天HI抗体达到最高,为1:5120。并且攻毒后并未出现犬流感临床症状,体温也维持在正常水平,并且免疫组只有一只犬鼻拭子病毒滴度在第2天排毒。本研究选育出GD1404株为疫苗毒株,通过灭活工艺的优化并且建立了科学的CI临床症状评分标准,制备了安全有效的GEL01佐剂灭活疫苗,为CIV的防治具有重要的公共卫生学意义。
二、日本发现有两种不同型的犬瘟热（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、日本发现有两种不同型的犬瘟热（论文提纲范文）
（1）犬瘟热病毒流行毒株序列分析及纳米抗体噬菌体库的构建与筛选（论文提纲范文）
| 附件 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 犬瘟热简介 |
| 1.2 犬瘟热病毒简介 |
| 1.3 犬瘟热流行病学及预防 |
| 1.4 犬瘟热诊断方法 |
| 1.5 犬瘟热治疗 |
| 1.5.1 犬瘟热的对因治疗 |
| 1.5.2 犬瘟热的对症治疗 |
| 1.6 纳米抗体的发现 |
| 1.7 纳米抗体的特点 |
| 1.8 纳米抗体库的筛选 |
| 1.9 纳米抗体的应用 |
| 1.9.1 纳米抗体在检测中的应用 |
| 1.9.2 纳米抗体在疾病治疗中的应用 |
| 1.10 研究的目的和意义 |
| 第二章 济南地区犬瘟热病毒H基因克隆及其遗传进化分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 病料来源 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 病料处理 |
| 2.2.2 样品RNA提取及反转录 |
| 2.2.3 引物设计与合成 |
| 2.2.4 H基因的扩增与克隆 |
| 2.2.5 H基因序列分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 CDVH基因扩增 |
| 2.3.2 CDVH基因同源性分析 |
| 2.3.3 CDV H基因序列分析 |
| 2.3.4 CDVH基因潜在天冬酰胺糖基化位点分析 |
| 2.3.5 CDVH基因氨基酸位点变异分析 |
| 2.3.6 CDVH基因抗原表位预测分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 CDV特异性抗体噬菌体文库的构建与鉴定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 毒种、载体和实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂与耗材 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 |
| 3.1.4 主要溶液配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 CDV的扩繁与鉴定 |
| 3.2.2 羊驼免疫及抗体水平检测 |
| 3.2.3 免疫后淋巴细胞分离 |
| 3.2.4 外周血总RNA提取 |
| 3.2.5 RNA的反转录 |
| 3.2.6 VHH基因PCR扩增 |
| 3.2.7 M13噬菌体抗体库的构建 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 CDV-11株病毒培养 |
| 3.3.2 CDV-11株纯化及鉴定 |
| 3.3.3 ELISA检测血清抗体效价 |
| 3.3.4 VHH基因PCR扩增结果 |
| 3.3.5 M13噬菌体库构建与鉴定 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 犬瘟热纳米抗体的筛选与表达 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 菌株和载体 |
| 4.1.2 主要试剂与耗材 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 |
| 4.1.4 主要溶液配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 CDV特异性抗体噬菌体文库的构建 |
| 4.2.2 CDV特异性重组噬菌体的淘选和富集 |
| 4.2.3 噬菌体单克隆检测 |
| 4.2.4 重组表达载体的构建 |
| 4.2.5 重组抗体的表达 |
| 4.2.6 重组抗体的纯化及WB鉴定 |
| 4.2.7 ELISA方法验证重组抗体结合力 |
| 4.2.8 IFA验证重组抗体特异性结合CDV |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 CDV特异性纳米抗体的淘选 |
| 4.3.2 噬菌体单克隆检测 |
| 4.3.3 重组表达载体的PCR鉴定 |
| 4.3.4 纳米抗体的表达及纯化 |
| 4.3.5 ELISA方法鉴定CDV纳米抗体结合力 |
| 4.3.6 IFA验证重组抗体结合CDV |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）威海地区主要毛皮动物常见病原体检测及微生态防治（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略语表 |
| 第一章 毛皮动物主要病毒性传染病研究进展 |
| 1.1.犬瘟热研究进展 |
| 1.1.1.CDV的分类与形态结构 |
| 1.1.2.CDV基因组编码蛋白及其功能 |
| 1.1.3.CDV的流行病学 |
| 1.1.4.CDV的临床症状 |
| 1.1.5.CDV的诊断技术进展 |
| 1.1.6.CDV的防治研究进展 |
| 1.2.毛皮动物细小病毒病研究进展 |
| 1.2.1.细小病毒的分类 |
| 1.2.2.生物学差异 |
| 1.2.3.MEV的研究进展 |
| 1.2.4.细小病毒疫苗的研究进展 |
| 1.3.水貂阿留申病研究进展 |
| 1.3.1.AMDV的分类与形态结构 |
| 1.3.2.AMDV的分子生物学特性 |
| 1.3.3.AMDV的流行病学与临床症状 |
| 1.3.4.AMDV的检测技术进展 |
| 1.3.5.ADM的综合防治措施 |
| 第二章 毛皮动物主要细菌性疾病研究进展 |
| 2.1.大肠杆菌病研究进展 |
| 2.1.1.病原学 |
| 2.1.2.流行病学 |
| 2.1.3.临床症状与病理变化 |
| 2.1.4.防治措施 |
| 2.2.肺炎克雷伯氏菌病研究进展 |
| 2.2.1.病原学 |
| 2.2.2.流行病学 |
| 2.2.3.临床症状与病理变化 |
| 2.2.4.防治措施 |
| 2.3.绿脓杆菌病研究进展 |
| 2.3.1.病原学 |
| 2.3.2.流行病学 |
| 2.3.3.临床症状与病理变化 |
| 2.3.4.防治措施 |
| 第三章 威海地区主要毛皮动物养殖及疾病防治情况调查 |
| 3.1.材料与方法 |
| 3.1.1.调查范围 |
| 3.1.2.调查内容 |
| 3.1.3.调查途径 |
| 3.2.结果 |
| 3.2.1.养殖概况 |
| 3.2.2.防疫情况 |
| 3.2.3.常见疫病免疫情况 |
| 3.2.4.养殖用药情况 |
| 3.2.5.主要发病情况 |
| 3.3.讨论 |
| 3.3.1.养殖数量与密度的影响 |
| 3.3.2.不同饲养管理水平的影响 |
| 3.3.3.防疫措施的影响 |
| 3.3.4.疫苗免疫的因素 |
| 3.3.5.畜牧管理体制变动的影响 |
| 3.3.6.主要疾病传播流行特点 |
| 3.4.小结 |
| 第四章 威海地区主要毛皮动物大型养殖场常见病毒的PCR检测及序列分析 |
| 4.1.材料与方法 |
| 4.1.1.样品采集 |
| 4.1.2.主要实验试剂与仪器 |
| 4.1.3.样品的处理 |
| 4.1.4.核酸的提取 |
| 4.1.5.病毒性病原的检测 |
| 4.2.结果 |
| 4.2.1.病料剖检结果 |
| 4.2.2.CDV的检测结果 |
| 4.2.3.CDV的序列分析结果 |
| 4.2.4.MEV的检测结果 |
| 4.2.5.MEV的序列分析结果 |
| 4.2.6.AMDV的检测结果 |
| 4.2.7.感染统计结果 |
| 4.3.讨论 |
| 4.3.1.病毒性疾病持续流行 |
| 4.3.2.疫苗免疫保护出现漏洞 |
| 4.4.小结 |
| 第五章 威海地区主要毛皮动物大型养殖场病原菌的分离鉴定及药物敏感性试验 |
| 5.1.材料与方法 |
| 5.1.1.样品来源 |
| 5.1.2.主要实验试剂与仪器 |
| 5.1.3.样品剖检 |
| 5.1.4.细菌的分离培养 |
| 5.1.5.细菌的纯化与染色 |
| 5.1.6.生化鉴定与药敏试验 |
| 5.1.7.血清型鉴定 |
| 5.2.结果 |
| 5.2.1.病料剖检症状 |
| 5.2.2.细菌的分离及生化鉴定结果 |
| 5.2.3.分离菌的药敏实验结果 |
| 5.2.4.血清学分型统计结果 |
| 5.2.5.感染统计结果 |
| 5.3.讨论 |
| 5.3.1.病原种类多样,混合感染突出 |
| 5.3.2.条件性致病菌感染流行普遍 |
| 5.3.3.细菌耐药性需要加强关注 |
| 5.4.小结 |
| 第六章 饲料中添加益生菌制剂对水貂免疫功能的影响 |
| 6.1.材料与方法 |
| 6.1.1.实验材料 |
| 6.1.2.实验动物及饲粮 |
| 6.1.3.实验设计与饲养管理 |
| 6.1.4.免疫指标的测定 |
| 6.1.5.疫苗抗体的测定 |
| 6.1.6.试验数据统计 |
| 6.2.结果 |
| 6.2.1.益生菌制剂对水貂免疫指标的影响 |
| 6.2.2.益生菌制剂对水貂犬瘟热疫苗抗体的影响 |
| 6.3.讨论 |
| 6.4.小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（3）沈阳地区宠物犬猫主要传染病流行特点及犬细小病毒的遗传进化分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 宠物猫狗的现状及宠物医院的发展 |
| 1.2 宠物猫狗主要流行病 |
| 1.2.1 犬细小病毒病 |
| 1.2.2 犬瘟热 |
| 1.2.3 犬瘟热病毒的实验室诊断 |
| 1.2.4 犬瘟热病毒分离鉴定 |
| 1.2.5 犬瘟热病毒分子生物学诊断方法 |
| 1.2.6 犬冠状病毒病 |
| 1.2.7 猫瘟 |
| 1.2.8 犬猫皮肤病及其他寄生虫病 |
| 1.3 ARIMA模型 |
| 1.4 犬细小病毒VP2基因和NS1基因 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 第二章 沈阳地区宠物猫狗流行病的季节性分析 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 数据搜集 |
| 2.1.2 病例定义 |
| 2.1.3 数据处理及统计方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 统计结果 |
| 2.2.2 四种类型的流行病ARIMA模型 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 宠物猫狗传染病季节性变化影响因素分析 |
| 2.3.2 辽宁地区犬细小病毒流行情况 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 犬细小病毒遗传进化分析 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 临床样本 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 犬细小病毒DNA的提取 |
| 3.1.5 VP2、NS1基因扩增 |
| 3.1.6 VP2、NS1基因序列拼接 |
| 3.1.7 序列比对及病毒鉴定 |
| 3.1.8 VP2及NS1序列分析及系统发育树构建 |
| 3.1.9 分子进化分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 VP2、NS1基因扩增结果 |
| 3.2.2 VP2、NS1基因同源性分析 |
| 3.2.3 VP2、NS1基因系统发育树的构建 |
| 3.2.4 亚型分析和VP2、NS1基因突变位点分析 |
| 3.2.5 分子进化分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 我国CPV及各亚型流行情况 |
| 3.3.2 犬细小病毒的分子进化分析 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 结论、创新点和展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 |
（4）犬瘟热病毒N蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词或符号表 |
| 1 引言 |
| 1.1 犬瘟热病原学 |
| 1.1.1 犬瘟热病毒的分类与形态 |
| 1.1.2 犬瘟热病毒传播方式以及环境耐受性 |
| 1.1.3 犬瘟热病毒的基因组与结构 |
| 1.2 犬瘟热的流行病学特征 |
| 1.2.1 宿主范围 |
| 1.2.2 宿主细胞受体 |
| 1.2.3 血清学调查 |
| 1.2.4 流行与分布情况 |
| 1.3 临床症状、发病机制及病理变化 |
| 1.4 CDV的诊断 |
| 1.4.1 病理学诊断 |
| 1.4.2 分子生物学诊断 |
| 1.4.3 血清学诊断 |
| 1.4.4 CDV的分离与培养特性 |
| 1.5 CDV的治疗及预防 |
| 1.6 研究背景及研究意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒、菌种、载体、细胞系、实验动物 |
| 2.1.2 细菌培养相关试剂 |
| 2.1.3 分子生物学试剂 |
| 2.1.4 细胞培养试剂 |
| 2.1.5 主要溶液 |
| 2.1.6 抗体 |
| 2.1.7 主要仪器及耗材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 CDV在 Vero.细胞上的传代 |
| 2.2.2 病毒的RT-PCR鉴定 |
| 2.2.3 CDVN基因的扩增 |
| 2.2.4 原核表达载体的构建 |
| 2.2.5 CDVN基因在大肠杆菌中的原核表达 |
| 2.2.6 表达产物的检测分析 |
| 2.2.7 表达条件的优化 |
| 2.2.8 目的蛋白的可溶性分析 |
| 2.2.9 包涵体的溶解与复性 |
| 2.2.10 目的蛋白的纯化 |
| 2.2.11 纯化蛋白浓度测定 |
| 2.2.12 表达后纯化产物的质谱分析 |
| 2.2.13 N蛋白抗原制备 |
| 2.2.14 BABL/c小鼠的免疫 |
| 2.2.15 间接ELISA条件摸索 |
| 2.2.16 细胞融合 |
| 2.2.17 阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 2.2.18 阳性杂交瘤细胞的克隆化 |
| 2.2.19 阳性杂交瘤细胞扩大培养及冻存 |
| 2.2.20 细胞复苏 |
| 2.2.21 腹水制备 |
| 2.2.22 腹水抗体效价的测定 |
| 2.2.23 特异性检测 |
| 2.2.24 抗体亚型的鉴定 |
| 3 结果 |
| 3.1 犬瘟热病毒的RT-PCR鉴定 |
| 3.2 N基因的PCR扩增 |
| 3.3 表达质粒的鉴定 |
| 3.4 pET-22b-CDVN的体外诱导及诱导条件的优化 |
| 3.4.1 原核表达CDVN |
| 3.4.2 原核表达CDVN条件的优化 |
| 3.4.3 原核表达CDVN的可溶性分析 |
| 3.5 表达CDVN蛋白的体外纯化 |
| 3.6 免疫小鼠的抗CDVN蛋白的抗体浓度检测 |
| 3.6.1 间接ELISA实验条件的摸索 |
| 3.6.2 小鼠免疫效果检测 |
| 3.7 分泌抗CDV N阳性抗体的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0 融合 |
| 3.8 获取稳定分泌抗CDVN抗体的克隆 |
| 3.8.1 阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 3.8.2 阳性细胞的亚克隆 |
| 3.9 腹水的检测 |
| 4 全文讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 细胞融合 |
| 4.1.2 单克隆抗体的制备 |
| 4.1.3 CDV的预防与控制 |
| 4.2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
（5）犬瘟热弱毒疫苗耐热冻干保护剂的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 1.1 冷冻干燥技术概述 |
| 1.2 冷冻干燥过程及原理 |
| 1.3 冷冻干燥对病毒的影响 |
| 1.4 保护剂的定义及分类 |
| 1.5 保护剂组成成分及作用机理 |
| 1.6 犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂 |
| 1.7 耐热冻干保护剂的作用机理 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 犬瘟热病毒(Ondersteport株)培养条件优化 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 犬瘟热弱毒疫苗耐热冻干保护剂的筛选及进一步优化 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（6）犬瘟热时空动力学及黑龙江省东部地区犬瘟热风险预测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景介绍 |
| 1.1.1 气候变迁与犬瘟热的发生密切相关 |
| 1.1.2 黑龙江省东部干旱化成为犬瘟热发生的潜在风险条件 |
| 1.1.3 利用MaxEnt预测疾病分布已成为当前研究热点 |
| 1.1.4 黑龙江省东部犬瘟热溯源工作亟待开展 |
| 1.2 国内外研究现状及问题 |
| 1.2.1 犬瘟热国内外研究现状 |
| 1.2.1.1 犬瘟热的发现 |
| 1.2.1.2 犬瘟热的病原生物学特征 |
| 1.2.1.3 犬瘟热的流行病学研究 |
| 1.2.1.4 防控措施 |
| 1.2.1.5 犬瘟热检测方法概述 |
| 1.2.1.6 野生动物疾病空间过程国内外研究进展 |
| 1.2.1.7 犬瘟热的进化遗传学研究进展 |
| 1.2.2 目前该领域存在的科学问题 |
| 2 黑龙江省东部地区犬瘟热易感野生动物分布及对气象要素响应的效应区间分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 研究区域和数据收集 |
| 2.1.1.1 研究区域 |
| 2.1.1.2 犬瘟热易感野生动物分布数据的收集 |
| 2.1.1.3 环境变量数据的收集 |
| 2.1.2 空间建模数据的预处理 |
| 2.1.2.1 空间自相关的避免 |
| 2.1.2.2 环境变量的筛选 |
| 2.1.3 MaxEnt模型预测与检验 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 物种分布点的过滤和环境变量的选择 |
| 2.2.1.1 物种分布点的过滤 |
| 2.2.1.2 环境变量的选择 |
| 2.2.2 犬瘟热易感野生动物分布预测 |
| 2.2.2.1 模型精度评价 |
| 2.2.2.2 犬瘟热易感野生动物分布与环境因子的关系 |
| 2.2.2.3 环境变量的效应区间分析 |
| 2.2.2.4 犬瘟热易感野生动物分布区预测 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 黑龙江省东部地区犬瘟热空间分布及对气象要素响应的效应区间分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 研究区域和数据收集 |
| 3.1.1.1 研究区域 |
| 3.1.1.2 犬瘟热发生分布数据的收集 |
| 3.1.1.3 环境变量数据的收集 |
| 3.1.2 空间建模数据的预处理 |
| 3.1.2.1 空间自相关的避免 |
| 3.1.2.2 环境变量的筛选 |
| 3.1.3 MaxEnt空间模型预测与检验 |
| 3.1.4 黑龙江省东部地区犬瘟热高发地风险分布预测 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 犬瘟热分布点的过滤和环境变量的选择 |
| 3.2.1.1 犬瘟热分布点的过滤 |
| 3.2.1.2 环境变量的选择 |
| 3.2.2 犬瘟热分布预测 |
| 3.2.2.1 模型精度评价 |
| 3.2.2.2 犬瘟热分布与环境因子的关系 |
| 3.2.2.3 环境变量的效应区间分析 |
| 3.2.2.4 犬瘟热适宜分布区预测 |
| 3.2.3 黑龙江省东部地区犬瘟热高发地风险分布预测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 全球犬瘟热时空动力学分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 病毒序列的获取及数据的处理 |
| 4.1.2 系统发育树的构建 |
| 4.1.3 系统进化及种群动态分析 |
| 4.1.4 贝叶斯系统发生生物地理学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 系统发育树的分析 |
| 4.2.2 犬瘟热的进化特征分析 |
| 4.2.2.1 模型收敛情况评价 |
| 4.2.2.2 系统发育分析 |
| 4.2.2.3 种群动态分析 |
| 4.2.2.4 不同宿主间传播概率的分析 |
| 4.2.3 系统发育地理学分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 中国犬瘟热时空动力学及黑龙江省犬瘟热溯源研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 病毒序列的获取及数据的处理 |
| 5.1.2 系统发育树的构建 |
| 5.1.3 系统进化及种群动态分析 |
| 5.1.4 贝叶斯系统发生生物地理学分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 系统发育树的分析 |
| 5.2.2 犬瘟热的进化特征分析 |
| 5.2.2.1 模型收敛情况评价 |
| 5.2.2.2 系统发育分析 |
| 5.2.2.3 种群动态分析 |
| 5.2.3 系统发育地理学分析 |
| 5.2.4 黑龙江省犬瘟热溯源 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 黑龙江省东部地区养殖狐精液病毒宏基因组学分析 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.1.1 狐狸精液样品的采集 |
| 6.1.1.2 主要试剂及配制 |
| 6.1.1.3 主要实验设备 |
| 6.1.2 实验方法 |
| 6.1.2.1 狐狸精液的前处理 |
| 6.1.2.2 狐狸精液的核酸酶消化 |
| 6.1.2.3 病毒核酸的提取 |
| 6.1.2.4 逆转录和双链DNA的合成 |
| 6.1.2.5 高通量测序文库的构建 |
| 6.1.2.6 文库的扩增 |
| 6.1.2.7 文库的纯化 |
| 6.1.2.8 文库DNA片段的筛选 |
| 6.1.2.9 病毒文库质量的检测 |
| 6.1.2.10 病毒文库的Miseq深度测序 |
| 6.1.2.11 文库测序结果的生物信息学分析 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 病毒宏基因组DNA文库的质量检测 |
| 6.2.1.1 文库中DNA片段分布检测 |
| 6.2.1.2 病毒文库的Bioanalyzer检测 |
| 6.2.1.3 Miseq测序质量分析 |
| 6.2.2 黑龙江省东部地区狐狸精液病毒宏基因组学分析结果 |
| 6.2.2.1 狐狸精液病毒群落的序列分析 |
| 6.2.2.2 狐狸精液病毒群落的分类 |
| 6.3 补充材料 |
| 6.3.1 材料与方法 |
| 6.3.2 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录1 英文缩略语 |
| 附录2 黑龙江省犬瘟热易感野生动物分布 |
| 附录3 中国犬瘟热的地理发生位点 |
| 附录4 全球犬瘟热H基因序列背景信息表 |
| 附录5 中国犬瘟热病毒毒株H基因全序列背景信息表 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 东北林业大学博士学位论文修改情况确认表 |
（8）南昌市犬源犬瘟热病毒的检测及其流行病学调查（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分：文献综述 |
| 1 CD的流行病学 |
| 2 CD的临床症状 |
| 3 CD的发病机理 |
| 4 CD的病理学改变 |
| 5 CD的诊断 |
| 5.1 一般检查 |
| 5.2 血清学试验 |
| 5.3 病毒的分离鉴定 |
| 5.4 动物接种试验 |
| 5.5 PCR和荧光定量PCR检测 |
| 5.6 电镜诊断 |
| 5.7 包涵体检查 |
| 6 CDV的分子生物学特性 |
| 6.1 病毒分类地位 |
| 6.2 病毒粒子结构 |
| 6.3 病毒理化特性 |
| 6.4 CDV基因组 |
| 6.5 CDV糖蛋白的结构和功能 |
| 7 本研究的目的与意义 |
| 第二部分：试验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 病例简介 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要试剂的制备 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 病理学观察试验方法 |
| 1.2.2 CDVSYBRGreenI荧光定量PCR方法的改进 |
| 1.2.2.1 引物设计与合成 |
| 1.2.2.2 阳性模板制备 |
| 1.2.2.3 质粒构建 |
| 1.2.2.4 扩大培养、提取并稀释质粒 |
| 1.2.2.5 荧光定量PCR引物的验证 |
| 1.2.2.6 荧光定量PCR最佳条件选择 |
| 1.2.2.7 建立标准曲线和熔解曲线 |
| 1.2.2.8 敏感性试验 |
| 1.2.2.9 重复性试验 |
| 1.2.2.10 特异性试验 |
| 1.2.2.11 样品的检测 |
| 1.2.3 犬源CDV江西株gN、gH基因的克隆与测序方法 |
| 1.2.3.1 PCR的引物设计与合成 |
| 1.2.3.2 CDVcDNA模板的制备 |
| 1.2.3.3 gN、gH基因克隆和测序 |
| 1.2.3.4 gN、gH基因对比和进化分析 |
| 1.2.4 南昌市CD流行病学调查方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 病理学观察 |
| 2.1.1 病理学解剖观察 |
| 2.1.2 病理学组织石蜡切片观察 |
| 2.1.3 病理学组织电镜切片观察 |
| 2.2 荧光定量PCR方法的改进与病犬组织的病毒含量比较 |
| 2.2.1 标准阳性模板的PCR扩增和测序 |
| 2.2.2 菌液的PCR扩增和测序 |
| 2.2.3 质粒浓度测定和荧光定量PCR引物的验证 |
| 2.2.4 SYBRGreenI荧光定量PCR反应条件的确立 |
| 2.2.5 标准曲线和熔解曲线的建立和分析 |
| 2.2.6 敏感性试验结果 |
| 2.2.7 重复性试验结果 |
| 2.2.8 特异性试验结果 |
| 2.2.9 样品检测 |
| 2.2.10 荧光定量PCR检测CD犬组织的病毒含量 |
| 2.3 犬源CDV江西株gN、gH基因的克隆与测序 |
| 2.3.1 CDV江西株gN基因的PCR扩增 |
| 2.3.2 CDV江西株gH基因的PCR扩增 |
| 2.3.3 CDV江西株gN基因分析 |
| 2.3.3.1 CDV江西株gN基因核苷酸和氨基酸序列分析 |
| 2.3.3.2 CDVgN遗传进化分析结果 |
| 2.3.4 CDV江西株gH基因分析 |
| 2.3.4.1 CDV江西株gH基因核苷酸和氨基酸序列分析 |
| 2.3.4.2 CDVgH遗传进化分析结果 |
| 2.4 南昌市CD流行病学调查结果 |
| 2.4.1 南昌市CD发病率 |
| 2.4.2 CD发病与品种、血统和体型的关系 |
| 2.4.3 CD发病与年龄的关系 |
| 2.4.4 CD发病与性别的关系 |
| 2.4.5 CD发病与免疫情况的关系 |
| 2.4.6 CD发病与季节的关系 |
| 3 讨论 |
| 3.1 病理学观察的讨论 |
| 3.1.1 呼吸系统 |
| 3.1.2 免疫系统 |
| 3.1.3 消化系统 |
| 3.1.4 神经系统 |
| 3.1.5 血液循环系统 |
| 3.1.6 包涵体及电镜检测 |
| 3.2 SYBRGreenI荧光定量PCR改进的探讨 |
| 3.3 CD犬不同组织的病毒含量的比较 |
| 3.4 CDV江西株基因序列比对 |
| 3.5 CD流行病学调查 |
| 3.5.1 兽医临床诊断技术对CD流行病学调查的影响 |
| 3.5.2 南昌市CD的流行特点和发病规律 |
| 3.5.3 CD的预防控制 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（9）犬瘟热病毒H蛋白与不同动物SLAM相互作用致细胞融合效率差异的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 犬瘟热病毒概述 |
| 1.2 CDV结构蛋白 |
| 1.3 CDV受体 |
| 1.3.1 SLAM |
| 1.3.2 nectin-4 |
| 1.3.3 其它受体 |
| 1.3.4 未知神经受体 |
| 1.4 CDV的跨宿主感染 |
| 1.4.1 SLAM和nectin-4受体在CDV致病性及跨宿主感染中的作用 |
| 1.4.2 其他因素 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 第二章 SLAM受体V区74、129位氨基酸替换对犬瘟热病毒致细胞融合的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 质粒、细胞株 |
| 2.1.2 主要试剂及设备 |
| 2.1.3 SLAM-V区蛋白三维结构的同源建模 |
| 2.1.4 SLAM突变体的构建及鉴定 |
| 2.1.5 BHK-21细胞转染 |
| 2.1.6 间接免疫荧光检测SLAM的表达 |
| 2.1.7 流式细胞术检测SLAM表达量 |
| 2.1.8 细胞融合实验 |
| 2.1.9 Hoechst33342核染色 |
| 2.1.10 平均合胞体数的计算及统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 SLAM蛋白三维结构 |
| 2.2.2 SLAM突变体的构建及鉴定 |
| 2.2.3 间接免疫荧光方法检测SLAM的表达 |
| 2.2.4 流式细胞术定量SLAM表达量 |
| 2.2.5 细胞融合及其Hoechst33342核染色结果 |
| 2.2.6 平均合胞体数的计算及统计学分析结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 稳定表达水貂SLAM受体BHK-21细胞系的建立及初步应用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 病料、毒株 |
| 3.1.2 细胞、质粒 |
| 3.1.3 主要试剂及设备 |
| 3.1.4 G418最适浓度的确定 |
| 3.1.5 稳定表达mSLAM的BHK-21单克隆细胞系的建立 |
| 3.1.6 mSLAM基因转录及蛋白表达检测 |
| 3.1.7 CDV强毒株在BMS细胞中生长情况 |
| 3.1.8 CDV流行毒株的分离及鉴定 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 BMS细胞中mSLAM基因的转录及蛋白表达检测 |
| 3.2.2 CDV强毒株在BMS细胞中生长情况 |
| 3.2.3 CDV分离株的鉴定 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）H3N2亚型犬流感病毒GEL01佐剂灭活疫苗的研制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 流感病毒概述 |
| 1.2 犬流感 |
| 1.2.1 犬流感概述 |
| 1.2.2 犬流感病毒攻毒模型 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 第二章 H3N2亚型犬流感病毒GEL01佐剂灭活疫苗候选株的培育鉴定与攻毒模型的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 疫苗候选毒株传代结果 |
| 2.2.2 纯净性检验结果 |
| 2.2.3 病毒理化特性的鉴定 |
| 2.2.4 病毒EID_(50)的测定 |
| 2.2.5 犬的致病性试验和攻毒模型的建立 |
| 2.2.6 疫苗毒株遗传特性分析 |
| 2.2.7 病毒种子批的建立 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 H3N2亚型犬流感病毒GEL01佐剂灭活疫苗灭活技术的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 灭活技术的研究结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 H3N2亚型犬流感病毒GEL01佐剂灭活疫苗对犬攻毒保护的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 病毒的EID_(50)测定 |
| 4.2.2 灭活疫苗的检验 |
| 4.2.3 犬的攻毒保护试验 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
四、日本发现有两种不同型的犬瘟热（论文参考文献）
- [1]犬瘟热病毒流行毒株序列分析及纳米抗体噬菌体库的构建与筛选[D]. 王召阳. 中国农业科学院, 2020(01)
- [2]威海地区主要毛皮动物常见病原体检测及微生态防治[D]. 赵国清. 甘肃农业大学, 2019(11)
- [3]沈阳地区宠物犬猫主要传染病流行特点及犬细小病毒的遗传进化分析[D]. 赵雨馨. 沈阳农业大学, 2019(03)
- [4]犬瘟热病毒N蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备[D]. 姜贺. 华南农业大学, 2019(02)
- [5]犬瘟热弱毒疫苗耐热冻干保护剂的研究[D]. 毕津豪. 吉林农业大学, 2019(03)
- [6]犬瘟热时空动力学及黑龙江省东部地区犬瘟热风险预测[D]. 王昊宁. 东北林业大学, 2019(01)
- [7]犬瘟热预防生物制剂研究进展[A]. 郑颖,范泉水. 第18次全国犬业科技学术研讨会论文集, 2018
- [8]南昌市犬源犬瘟热病毒的检测及其流行病学调查[D]. 孟璞岩. 江西农业大学, 2018(02)
- [9]犬瘟热病毒H蛋白与不同动物SLAM相互作用致细胞融合效率差异的分子机制[D]. 王雅文. 中国农业科学院, 2018(12)
- [10]H3N2亚型犬流感病毒GEL01佐剂灭活疫苗的研制[D]. 罗杰. 华南农业大学, 2018(08)