一、胰岛素样生长因子Ⅰ的抗心肌细胞凋亡作用(英文)（论文文献综述）
赵卓[1]（2021）在《长链非编码RNA XIST在心肌肥厚中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:心肌肥厚是心脏在生理和病理超负荷状态下最初为了维持心脏功能而发生的适应性反应,以心肌细胞体积增大和心肌质量增加为特征,此时心肌细胞总量增加,收缩力增强,使得心脏得以维持正常的收缩功能。然而,当心脏长期处于病理性应激状态下,将会诱发病理性心肌肥厚,主要表现为心肌细胞体积增大、间质和血管周围纤维化、心肌细胞丢失、胶原蛋白增多和肌成纤维细胞活化,如果这一系列改变不能在短时间内得到改善,将会导致适应性不良的心室重塑,最终导致心力衰竭和猝死。因此,全面深入地研究心肌细胞肥大的发生机制,将有助于早期预防和控制心肌肥厚的发生发展,对于预防和治疗心力衰竭具有重要的现实意义。长链非编码RNA（LncRNAs）是在真核生物中发现的一类长度大于200个核苷酸、缺乏显着开放阅读框、不具备编码蛋白质能力的RNA。大量的研究显示,LncRNAs参与调控心脏的各种生理和病理过程,与各种心血管疾病的发病机制密切相关。LncRNAs通过顺式调控、反式调控等多种方式参与调节基因转录、mRNA拼接、组蛋白修饰,促进转录因子激活,抑制下游基因表达。其中,LncRNAs作为竞争内源性RNA（CeRNA）,通过miRNA反应原件（MREs）竞争与miRNA结合,抑制miRNA的表达和活性,进而减少目的mRNA的降解,是LncRNAs调控的主要机制。越来越多的研究显示LncRNA-miRNA-mRNA之间的形成调控网络参与了心肌肥厚发生发展的病理生理过程。LncRNA XIST是哺乳动物X染色体转录沉默的主要调节因子,且LncRNA XIST表达上调是心肌肥厚病理生理过程中的一种特征性分子改变,但LncRNA XIST对心肌肥厚的影响尚不明确,有研究发现LncRNA XIST能促进心肌肥厚,但也有研究报道LncRNA XIST能够抑制心肌肥厚。因此,LncRNA XIST对心肌肥厚的作用及其机制尚需进一步研究。LncRNAs主要通过调控miRNA对目的蛋白发挥调控作用,利用生物信息学技术分析,筛选出与LncRNA XIST结合的miRNAs及相关的信号通路是研究其机制的技术手段。MiR-126a是LncRNA XIST的靶基因,而miR-126与心力衰竭、扩张型心肌病、心肌肥厚的发病机制密切相关。MiR-126a调控心肌肥厚的机制可能与靶向抑制IGF-1有关,已有研究发现IGF-1是miR-126a的靶基因并在调控心肌肥厚过程中发挥重要的作用,然而IGF-1的过度表达则可导致病理性心肌肥厚的发生发展。因此,我们推测,LncRNA XIST可能通过影响miR-126a/IGF-1调控心肌肥厚,研究上述机制,可为预防和治疗心力衰竭寻找相应的靶点,提供理论和实验基础。研究目的:我们在通过主动脉缩窄（TAC）建立的小鼠病理性心肌肥厚动物模型和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）作用下建立的心肌肥大细胞模型中,探索XIST在心肌肥厚发生发展过程中的作用和潜在的分子机制。研究方法:（1）采用主动脉缩窄（TAC）的方法建立小鼠病理性心肌肥厚的动物模型;通过心肌组织病理组织学H&E染色、测量小鼠HW/BW比值、心脏超声检查、qPCR和Western Blot的方法检测心肌组织中心肌肥厚相关基因和蛋白（ANP、BNP、β-MHC）的表达水平评价是否建模成功,同时检测心肌组织中XIST、miR-126a、IGF-1表达水平。（2）应用Ang Ⅱ处理HL-1细胞建立心肌肥大的细胞模型;通过免疫荧光染色测量细胞表面积、测量Protein/DNA比值、qPCR和Western Blot的方法检测心钠素（ANP）、脑钠素（BNP）、和β-肌球蛋白重链（β-MHC）水平作为评价心肌细胞肥大的指标,同时检测细胞中XIST、miR-126a、IGF-1表达水平。（3）应用si-XIST转染HL-1细胞建立XIST低表达细胞模型,通过免疫荧光染色测量细胞表面积、测量Protein/DNA比值、qPCR和Western Blot的方法检测心钠素（ANP）、脑钠素（BNP）、和β-肌球蛋白重链（β-MHC）水平评价XIST低表达对Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的影响,同时检测IGF-1的表达水平。生物信息学预测XIST与miR-126a之间存在潜在的结合位点,双荧光素酶基因报告实验验证XIST与miR-126a之间是否能够结合。（4）应用miR-126a mimics转染HL-1细胞建立miR-126a高表达细胞模型,通过免疫荧光染色测量细胞表面积、测量Protein/DNA比值、qPCR和Western Blot的方法检测心钠素（ANP）、脑钠素（BNP）、和β-肌球蛋白重链（β-MHC）水平评价miR-126a高表达对Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的影响,同时检测IGF-1的表达水平。生物信息学预测IGF-1与miR-126a之间存在潜在的结合位点,双荧光素酶基因报告实验验证IGF-1与miR-126a之间是否能够结合。Western Blot的方法检测Ang Ⅱ诱导的心肌肥大细胞模型中XIST低表达对Akt、p-Akt表达的影响。研究结果:（1）TAC组小鼠的心脏体积明显增大,心肌组织H&E染色心脏横截面积增大,心肌细胞排列紊乱,细胞间隙明显增宽;HW/BW比值增加;心脏彩超显示TAC组小鼠表现出典型的心肌肥厚特征;TAC组小鼠心肌组织中心肌肥厚相关基因心钠素（ANP）、脑钠素（BNP）和β-肌球蛋白重链（β-MHC）的表达水平也显着上调;上述结果表明,通过TAC的方法成功建立小鼠病理性心肌肥厚的动物模型。（2）在Ang Ⅱ的作用下,HL-1细胞表面积明显增大,Protein/DNA比值增加,心肌肥厚相关基因ANP、BNP和β-MHC的表达水平也显着上调,提示利用Ang Ⅱ成功诱导心肌肥大的细胞模型。（3）在病理性心肌肥厚动物模型和心肌肥大细胞模型中,XIST表达显着上调;在Ang Ⅱ诱导的心肌肥大细胞模型中沉默XIST,能够减小细胞表面积、降低Protein/DNA比值,抑制心肌肥厚相关基因的表达,提示沉默XIST能够抑制Ang Ⅱ促心肌肥大的作用。（4）miR-126a在病理性心肌肥厚动物模型心肌组织中表达水平明显下调,而且在AngⅡ诱导的心肌肥大细胞模型中miR-126a的表达与XIST之间呈负性相关;当沉默XIST后miR-126a的表达上调,双荧光素酶基因报告明确证实了XIST能够直接与miR-126a结合。（5）在Ang Ⅱ诱导的心肌肥大细胞模型中过表达miR-126a,能够减小细胞表面积、降低Protein/DNA比值,抑制心肌肥厚相关基因的表达,提示miR-126a具有抑制心肌肥大发生发展的作用。（6）在病理性心肌肥厚动物模型和心肌肥大细胞模型中,IGF-1表达显着上调,在Ang Ⅱ诱导的心肌肥大细胞模型中过表达miR-126a或沉默XIST,均能够抑制IGF-1的表达水平,双荧光素酶基因报告实验的结果证实IGF-1与miR-126a能够直接结合,提示在心肌细胞中XIST通过竞争性结合miR-126a从而促进IGF-1的表达。（7）在Ang Ⅱ诱导的心肌肥大细胞模型中,p-Akt的蛋白表达水平明显增加,而沉默XIST则能够降低p-Akt的蛋白表达水平。结论:在病理性心肌肥厚动物模型和细胞模型中,LncRNA XIST和IGF-1表达上调,而miR-126a表达下调,表明LncRNA XIST、IGF-1、miR-126a可能与心肌肥大的发生发展有关;沉默XIST或高表达miR-126a能够抑制Ang Ⅱ诱导的心肌肥大,提示XIST通过miR-126a发挥作用;LncRNA XIST通过靶向抑制miR-126a的表达激活IGF-1/Akt信号通路促进病理性心肌肥厚的发生发展。创新点及研究意义本研究发现了LncRNA XIST在病理性心肌肥厚动物模型和心肌肥大细胞模型中高表达并具有促进心肌肥厚的作用;并进一步阐明XIST促进病理性心肌肥厚的分子机制与竞争性结合miR-126a激活IGF-1/Akt信号通路有关。抑制LncRNA XIST表达或高表达miR-126a可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌肥大,有望成为预防或治疗心肌肥厚的新策略。
高宏杰[2]（2021）在《基于优化算法的痰瘀同治方抗心肌缺血再灌注损伤分子网络机制研究》文中指出1 研究目的心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia-reperfusion injury,MI/RI）常发生在心脏手术、冠脉搭桥、心肌梗塞后再通、心脏移植以及休克等情况下,已成为血运重建后常见的严重并发症。课题组的自拟方痰瘀同治方经过多年的临床观察发现其抗MI/RI疗效显着。故本研究拟采用网络药理学研究方法,探讨痰瘀同治方抗MI/RI的核心药效物质基础、潜在作用靶点及分子网络机制,对课题组前期开展的痰瘀同治方抗MI/RI的系列作用机制研究进行总结、补充和完善,为今后深入开展痰瘀同治方抗MI/RI的药理药效作用机制的实证研究指出方向。同时,为更好的预测和分析痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制,本研究对随机游走算法进行了优化和验证,为优化后的算法应用于中医药领域的网络药理学研究提供了参考依据。2 研究方法2.1基于优化算法的痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制研究应用OMIM数据库、GeneCards数据库、DisGeNET数据库和Pubmed数据库获得MI/RI的靶点。应用TCMSP数据库、TCMID数据库和化学专业数据库获得中药成分,应用SwissADME数据库筛选中药的活性成分,并用SwissTargetPrediction数据库预测中药活性成分的靶点。将痰瘀同治方中药活性成分的靶点和MI/RI的靶点做映射,获得痰瘀同治方抗MI/RI的潜在作用靶点,应用String数据库筛选出核心潜在作用靶点。运用cytoscape3.7.2软件构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”关系的网络图,计算痰瘀同治方中药活性成分抗MI/RI的网络效力值,得出痰瘀同治方抗MI/RI的核心中药活性成分。应用Cluego插件对痰瘀同治方抗MI/RI的核心靶点进行富集分析,探讨痰瘀同治方抗MI/RI的可能的潜在作用机制。为了快速有效的发现其可能的潜在作用机制,本研究对随机游走算法进行了优化,形成了基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法,并对该算法进行了验证。将优化后的算法应用于构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的关系网络中,获得痰瘀同治方抗MI/RI的可能潜在的核心靶点,应用Cluego插件对核心靶点进行富集分析,探讨痰瘀同治方抗MI/RI的可能潜在的分子网络机制。2.2痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制研究应用TCMSP数据库、TCMID数据库和化学专业数据库获取祛痰中药组/化瘀中药组的中药成分,应用SwissADME数据库筛选出中药的活性成分,并用SwissTargetPrediction数据库预测中药活性成分的靶点。将痰瘀同治方祛痰中药组中药活性成分/化瘀中药组中药活性成分的靶点与MI/RI的靶点做映射,分别获得痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的潜在的可能的靶点。应用String数据库获得祛痰中药组/化瘀中药组的核心靶点。应用DAVID数据库对祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的核心靶点进行富集分析,探讨痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的可能的潜在分子网络机制。3 结果3.1基于优化算法的痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制研究（1）MI/RI靶点共1283个;（2）痰瘀同治方中药活性成分683个,预测中药活性成分靶点共1452个;（3）痰瘀同治方抗MI/RI的靶点共398个,运用String数据库获得核心靶点共337个;（4）应用cytoscape3.7.2软件构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”关系网络,共有885个节点和12462条边,根据计算出的网络效力值获得痰瘀同治方抗MI/RI的核心中药活性成分;（5）对痰瘀同治方抗MI/RI的337个核心靶点进行富集分析,结果显示:GO分析生物反应过程共986个,KEGG信号通路共79条;（6）基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的核心网络共有节点269个,中药活性成分节点32个,疾病靶点节点237个。采用分子对接等方法对优化算法进行验证。（7）对痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”核心网络的237个靶点进行富集分析,结果显示:GO分析生物反应过程共739个,KEGG信号通路共131条。3.2痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制研究（1）痰瘀同治方祛痰中药组中药成分共173个,中药活性成分87个,预测中药活性成分靶点共560个;痰瘀同治方化瘀中药组中药成分共143个,中药活性成分194个,预测中药活性成分靶点共430个。（2）痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的靶点共178个,应用String数据库获得核心靶点140个;痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的靶点共155个,应用String数据库获得核心靶点113个。（3）对痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的140个核心靶点进行富集分析,结果显示:GO分析中生物反应过程共469个,KEGG信号通路共114条;对痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的113个核心靶点进行富集分析,结果显示:GO分析中生物反应过程共495个,KEGG信号通路共108条。4 结论4.1本研究提出的基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法可以准确快速的提取痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”核心网络,为该算法应用于中医药领域的网络药理学研究提供参考。4.2痰瘀同治方抗MI/RI核心中药活性成分共32个,核心中药为人参、川芎、薤白等6味中药。4.3痰瘀同治方呈现多成分、多靶点、多信号通路协同抗MI/RI的作用特点。本研究得出的痰瘀同治方抗MI/RI的“炎症反应”机制、痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的“凋亡过程负调控”作用机制与课题组前期的研究结果相吻合。此外,痰瘀同治方抗MI/RI的作用机制可能与“PI3K-Akt信号传导通路”“TNF信号通路”“ERK1和ERK2级联的正调控”“一氧化氮生物合成过程的正调控”“MAPK级联”作用机制有关。痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的作用机制还可能与“cAMP信号通路”有关,痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的作用机制可能与“HIF-1信号通路”和“血管内皮生长因子信号通路”有关。
李晓文[3]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制》文中提出研究背景糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖状态下出现的以心脏结构和功能异常为主要特征的病理改变,是糖尿病相关心脏并发症之一。糖心平胶囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治疗和改善糖尿病心脏病的中药制剂,但其机制仍不十分明确。本研究基于北京市科委课题“十病十药研发-治疗糖尿病合并冠心病新药糖心平胶囊成药性研究”,整合网络药理学和动物实验验证的研究方法,挖掘和验证TXPC药效及机制。研究目的通过网络药理学分析结合动物实验验证的研究方法挖掘并评价TXPC对DCM的治疗作用及机制探究。研究方法1、方法一:本研究通过TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中药材化学信息数据库挖掘TXPC组方中的活性成分化合物;通过Pubchem及Swiss Target Prediction平台预测筛选出组方作用靶点;通过Cytoscape软件构建TXPC药物-成分-靶点网络,利用Network Analyze插件分析筛选出TXPC组方中的核心成分;通过OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶点数据库构建DCM靶点合集;通过R Studio软件映射出TXPC靶点及DCM靶点交集;利用String在线蛋白功能分析网站构建TXPC-DCM-靶点网络,并导入Cytoscape软件进行可视化,构建PPI网络,通过Network Analyze分析筛选出PPI网络的核心靶点;通过MCODE插件对PPI网络进行模块分析;最后通过Matescape在线富集分析平台对PPI网络进行GO及KEGG分析,得到核心靶点的生物过程（BP）、分子功能（MF）、细胞组成（CC）及富集通路分析结果。2、方法二:本实验采用高脂饮食喂养联合小剂量STZ腹腔注射的方法制备DCM大鼠模型。在高脂饮食喂养4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用随机数字法将高脂喂养大鼠分为模型组（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低剂量（TXPD）组及二甲双胍组（Met）,正常饮食组为正常对照组（Control）。分组后连续给药6周,正常对照组和模型对照组采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高剂量组分别使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC药粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲双胍组采用每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液1ml/100g灌胃。给药时于第2、4、6周测大鼠空腹血糖;给药结束后,生化测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,计算HOMA-IR 值;ELISA 检测大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通过心脏病理切片观察心肌组织损伤情况,以明确TXPC对DCM的治疗作用;通过心脏超声检查评估心脏功能,利用舌下注射垂体后叶加压素制备大鼠急性心肌缺血模型,观察TXPC治疗后大鼠心电图ST-T段位移;进一步组织学检测DCM大鼠心肌组织 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印迹法检测大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA转录水平,以探究TXPC药效机制。研究结果1、方法一结果:糖心平组方中活性有效成分共107个;核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到对应靶点192个,关键靶点主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通过模块分析共聚类出4个功能模块,其中模块1和模块2所包含靶点数目较多,对糖心平胶囊对糖尿病心肌病的整体治疗效果具有较强的代表性;共富集到生物过程961个;分子功能75个;细胞组成60个;信号通路218条,能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、内分泌抵抗等途径发挥对DCM的治疗作用。2、方法二结果:①TXPC能够改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平,减轻心肌组织中的脂质沉积,发挥调节糖脂代谢得作用;②TXPC能够降低心肌损伤指标CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纤维断裂、损伤等,可能通过降低炎症水平,发挥心肌保护效应;③TXPC能够降低血清ET-I及TXB2,同时升高6-KPG水平,调节血管内皮细胞功能,预防心肌微血管病变;④TXPC能够降低血清MDA水平,缓解氧化应激损伤;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,维持心脏结构及形态的稳定,从而发挥心肌保护的作用;⑥TXPC能抵抗加压素所引起的ST-T抬高,提高心肌对急性心肌缺血的抵抗能力,从而发挥心脏保护的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促进GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA转录水平的表达,通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路,调节DCM大鼠能量代谢;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同时降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表达及NF-κBmRNA转录,通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路,发挥抑制炎症的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表达水平,同时降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号途径抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA转录表达,发挥抗心肌细胞损伤的作用;TXPC能促进PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表达,同时能促进PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的转录水平的提高,提示TXPC对DCM治疗效应的发挥,与PI3K/AKT通路有关。研究结论1、网络药理学分析结果显示,TXPC能通过PI3K/AKT信号通路,发挥对DCM的治疗作用;2、TXPC能调节糖脂代谢,改善炎症,降低氧化应激水平,发挥血管内皮细胞保护的作用;保护心功能、抗心肌缺血,具有心脏保护的作用;3、TXPC药效的发挥与PI3K/AKT信号通路有关,通过激活PI3K/AKT信号通路,从PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途径发挥对DCM的治疗作用。
谌子诺[4]（2021）在《基于靶点预测和高通量测序的丹蒌片干预稳定型心绞痛作用机制研究》文中研究说明越来越多的研究表明,中医治疗通过病证结合的辨治模式,在防治冠心病及其并发症方面发挥了重要作用。国内学者研究发现冠心病心绞痛患者常见证候要素中,属实证的证候要素以血瘀和痰浊出现频率最高。因此可见,痰与瘀是冠心病常见的证候要素,两者又多相互兼杂。《冠心病稳定型心绞痛中医诊疗专家共识》中指出针对痰瘀互结证患者,可选用中成药丹蒌片。现代研究表明丹蒌片对痰瘀互结型冠心病患者具有良好的临床治疗效果,能够调节血脂代谢系统,改善动脉粥样硬化,恢复心肌供血。目的:1.构建丹蒌片干预冠心病稳定型心绞痛的“成分-靶点”网络。2.聚类富集分析丹蒌片“寒、凉、温”不同药性的作用机制。3.临床研究获取丹蒌片干预稳定型心绞痛前后的差异基因,生信分析并验证药理预测网络。方法:1.丹蒌片干预稳定型心绞痛的“成分-靶点”网络预测。通过数据库与系统文献检索,收集丹蒌片药物成分;运用TCMSP、TCMID数据库和文献检索筛选成分的对应靶点;利用Cytoscape构建“成分-靶点”网络。结合STRING6等数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用映射,以MC.ODE算法识别核心节点,进行PPI网络功能注释。2.丹蒌片中药四性的分类功能富集。在构建的丹蒌片“成分-靶点”数据库中分别提取寒药、凉药、温药中活性成分对应的靶点,将获得的成分靶点分别输入Webgestalt生信分析工具,选择物种为人类基因组,运用ORA富集方法,通路选择KEGG与GO（BP、CC、MF）项目进行可视化分析。3.丹蒌片干预稳定型心绞痛痰瘀互结证的差异基因检测。选择试验组与对照组各5例受试者,采集干预前后血液4ml,进行高通量RNA测序,筛选找到丹蒌片干预稳定型心绞痛痰瘀互结证的差异基因表达谱,统一为Gene Symbol格式,与预测的药物成分靶点映射取交集,进行生物学注释与通路分析。结果:1.通过TCMSP数据库检索到丹蒌片药物活性成分共190个,根据《中国药典》与文献检索补充57个成分,将补充数据与TCMSP数据库检索数据比较去重后获得丹蒌片活性成分（瓜萎15个、薤白13个、葛根17个、川芎17个、丹参80个、赤芍36个、泽泻13个、黄芪26个、骨碎补20个和郁金17个）。通过TCMSP、TCMID数据库和文献检索筛选出丹蒌片活性成分对应的药理作用靶点,去除重复值后共得到369个药物成分靶点。利用OMIM、Drugbank、GeneCards、TTD与DisGeNET数据库查找稳定型心绞痛相关基因,去重后共计3385个疾病靶点。将丹蒌片的成分靶点与稳定型心绞痛的疾病靶点取交集得到292个基因,利用Cytoscape软件对其网络对应关系进行可视化处理。根据节点度值筛选发现排名前5的药物成分包括quercetin（槲皮素）、Daidzein（黄豆苷元）、luteolin（木犀草素）、kaempferol（山柰酚）、Puerarin（葛根素）,以上成分的度值均超过50,与多个疾病靶点相关,可能是丹蒌片干预稳定型心绞痛的主要活性成分。度值排名前5的靶点有6个,包括PTGS1（前列腺素内过氧化物合成酶1）、PTGS2（前列腺素内过氧化物合成酶2）、HSP90AA1（热休克蛋白90 α家族A类成员1）、NCOA2（核受体辅激活蛋白2）、ADRB2（β2肾上腺素能受体）、F2（凝血酶）,以上靶点的度值均超过40,与多个药物成分有靶向关系,可能是丹蒌片干预稳定型心绞痛药理网络中的核心节点。基于成分靶点与疾病靶点交集的292个基因,通过Metascape平台映射蛋白质间的相互作用关系,选取其中7类具有代表性的MCODE模块可视化分析,发现丹蒌片可能具有抗病毒感染、保护脊髓损伤、调节类固醇激素代谢、与GPCR配体结合、介导抗炎细胞因子、转运调节生长因子、活化中性粒细胞等多种药理作用。2.根据2020年版《中国药典》中关于丹蒌片组成的中药四性记载,将丹蒌片组成药物按药性分类,将大寒、寒、微寒统一归于寒,将温、微温均归于温。结果发现方中有寒药（瓜蒌、泽泻、郁金、丹参、赤芍）、凉药（葛根）、温药（薤白、川芎、骨碎补、黄芪）,无热性药物。基于第二章研究结果,在文献与TCMSP数据库提取到丹蒌片中寒药104个活性成分,检索获得对应的247个作用靶点;凉药12个活性成分,检索获得对应的159个作用靶点,温药58个活性成分,检索获得对应的296个作用靶点。按寒药、凉药、温药分类输入Webgestalt生信分析工具,选择物种为人类基因组,运用ORA富集方法,开展KEGG与GO通路富集,并进行可视化分析。结果发现在KEGG前10通路上,丹蒌片中寒药与凉药作用共同的通路“流体剪应力与动脉粥样硬化”,其原理可能与两者的组成药物皆具有辅助血行的功效有关。此外,寒药与温药均作用于IL-17信号通路。GO富集前10的结果表明寒药与温药的生物学过程都作用于炎症反应与免疫调节、应激反应与防御反应、细胞活化与分泌等方向。而凉药与另外两组存在部分差异,具体包括正调控多细胞生物过程、正调节催化活性、正调控细胞迁移、负调节刺激反应、稳态过程与细胞内信号转导的调节等方面。在细胞组成上,寒、温、凉药均与神经元投射相关、膜筏与质膜相关。其中寒药和温药还涉及树突区室,即神经元主要接受信号的部分。在分子功能上,寒药与凉药均与神经递质受体活性、G蛋白偶联胺受体活性、蛋白激酶结合、蛋白质同源二聚活性相关,而仅温药具有核受体活性。3.临床研究纳入受试者10例,干预前两组基线比较无显着性差异。试验过程中对照组1例患者脱落,4周药物干预结束后共计获实验组样本5例,对照组样本4例。依据2018年《冠心病心绞痛中医疗效评价标准》进行中医疗效评价,结果发现干预前试验组与对照组无统计学差异（p>0.05）,干预后试验组与对照组有统计学差异（p<0.05）。高通量测序后根据蛋白编码基因在不同样本中的表达量进行差异筛选,去除试验组中与对照组交集的33个基因（混杂因素）,剩下64个丹蒌片作用基因（其中52个上调,12个下调）,绘制火山图以查看两组治疗前后差异基因的整体分布情况。富集GO项目的显着节点发现试验组在生物学过程中下调较上调基因增加“节律过程”;细胞组成中,“突触”为下调项目独有,而“细胞外基质”为上调项目独有;分子功能中,上调项目较下调增加“酶调节活性”、“分子传感器活性”、“核酸结合转录因子,活性”、“蛋白质结合转录因子活性”、“受体调节活性”。KEGG top20分析发现试验组较对照组增加“幽门螺杆菌感染中的上皮细胞信号转导”、“上皮细胞的细菌入侵”、“肌动蛋白细胞骨架的调节”、“造血细胞谱系”、“紧密连接”、“粘附连接”与“EGFR酪氨酸激酶抑制剂抵抗”。将高通量测序得到的64个基因与预测的丹蒌片药物成分靶点数据库（369个靶点）比对,映射得到4个基因（EGF、F3、MET、MGST1）。以上基因对应药物成分的口服利用度均大于30,推测口服利用度高可能是药物疗效作用的基础。将这4个基因与构建的稳定型心绞痛的疾病靶点库（3385个靶点）比对,结果发现只有EGF、F3同时录属疾病靶点。综上,高通量测序结果验证了“成分-靶点”预测网络中的部分节点。结论:1.丹蒌片干预稳定型心绞痛具有复杂的多靶点药理作用机制,其核心药物成分可能与黄酮类化合物相关,主要药物靶点可能与炎症等基因相关。2.在药物共通性上,KEGG富集前10结果提示丹蒌片中寒药与凉药都作用于通路“流体剪应力与动脉粥样硬化”,其原理可能与寒药及凉药的组成药物皆具有辅助血行的功效有关。此外,寒药与温药均作用于IL-17信号通路。3.高通量测序结果表明丹蒌片干预冠心病稳定型心绞痛的活性成分之一可能是槲皮素,主要的靶点包括EGF与F3,这与“成分-靶点”预测网络的结果部分吻合。
尹一童[5]（2021）在《Lnc00839通过miR-19-3p/IGF-1分子轴对阴道壁成纤维细胞COL-1分泌影响及其分子机制探究》文中研究表明目的:盆腔脏器脱垂（Pelvic organ prolapse,POP）指的是由于女性盆底支持组织力量薄弱,盆腔内脏器经由阴道脱出于体外的一组疾病。盆腔脏器脱垂的发生通常与盆底结构支持系统松弛息息相关。从分子生物学角度探寻该疾病的发病机制,从而实现对疾病的早期诊断及早期干预,可以延缓疾病进程,减轻患者的痛苦,具有较重要的临床意义。在针对人体多个系统的多项研究结果显示,IGF-1的表达与成纤维细胞胶原蛋白表达程度相关。因此,我们推测,IGF-1表达异常可能与盆腔脏器脱垂的发病存在相关性。根据生信学分析结果,我们预测Lnc00839与IGF-1可能存在靶向调控关系,从而影响盆底结构中成纤维细胞胶原蛋白的表达。本文拟探寻IGF-1与盆腔脏器脱垂之间的关系,并进一步研究Lnc00839在盆腔脏器脱垂这一疾病中发挥的作用,以寻找与盆腔脏器脱垂相关的分子生物学机制,为疾病的早期诊断及早期干预提供潜在解决方案。方法:1.利用PCR及Western-blot等方法,检测并比较脱垂组患者阴道壁组织中与正常对照组患者阴道壁组织中Lnc00839、mi R-19-3p、IGF-1,IGF-1R,COL-1,COL-3的表达情况,并与器官脱垂临床严重程度进行相关性分析。2.对脱垂组及对照组组织中凋亡及自噬情况进行分析:TUNEL检测两组间组织凋亡情况,Western-blot检测两组中自噬标记物Beclin1、LC3II/I及凋亡标记物Bax、Bcl-2的表达情况。3.上调IGF-1后,检测下游COL-1及LC3II/I表达情况,上调Lnc00839后,检测下游IGF-1及IGF-1R表达情况。4.实验验证Lnc00839与mi R-19-3p的靶向作用关系。5.实验验证mi R-19-3p与IGF-1的靶向作用关系。6.Western-blot检测脱垂组及对照组中AKT,m TOR,p70s6k,p-AKT,p-m TOR,p-p70s6k的表达情况。7.构建高转Lnc00839的成纤维细胞,并滴加不同浓度的IGF-1后,检测下游通路蛋白AKT,m TOR,p70s6k,p-AKT,p-m TOR,p-p70s6k的表达情况,同时检测下游COL-1,IGF-1和IGF-1R的表达情况及自噬标记物表达情况。结果:1.在POP患者的阴道壁组织中,Lnc00839,COL-1及IGF-1,IGF-1R表达水平降低,且其表达水平与盆腔脏器脱垂严重程度呈负相关,mi R-19-3p表达水平增高,其表达水平与脱垂严重程度呈正相关。2.POP患者的阴道壁组织中自噬水平和凋亡水平增加,IGF-1可以通过抑制细胞过度自噬水平,促进COL-1的分泌。3.上调IGF-1后,下游COL-1表达水平增加,Lnc00839可以上调阴道壁成纤维细胞IGF-1表达。4.Lnc00839可以与mi R-19-3p靶向结合。5.mi R-19-3p与IGF-1可以靶向结合,从而抑制Lnc00839对下游IGF-1及COL-1的上调作用。mi R-19-3p通过促进细胞凋亡与过度自噬调节成纤维细胞的COL-1表达。6.AKT-m TOR-p70s6k是IGF-1调控成纤维细胞COL-1分泌的通路。7.Lnc00839调控IGF-1表达最终也可以经过AKT-m TOR-p70s6k通路调控成纤维细胞自噬水平,从而调控成纤维细胞COL-1分泌。结论:1.Lnc00839在盆腔脏器脱垂的阴道壁组织中表达降低,且与盆腔脏器严重程度呈负相关。2.IGF-1与COL-1的低表达可能和盆腔脏器脱垂发病相关。3.Lnc00839可以正向调控IGF-1的表达。成纤维细胞的过度自噬和凋亡可能是盆腔脏器脱垂发生的病理生理基础。4.Lnc00839可能通过与mi R-19-3p相互作用靶向作用于IGF-1,调节成纤维细胞的自噬及凋亡水平,从而COL-1的表达水平。5.Lnc00839通过mi R-19-3p靶向作用于IGF-1后,通过AKT-m TOR-p70s6k通路作用于成纤维细胞,从而调节成纤维细胞COL-1的表达。
谢金凤[6]（2020）在《运动通过IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路激活延缓衰老大鼠心肌细胞凋亡的机制》文中研究说明目的:以自然饲养的老年SPF级Wistar大鼠为模型,用耐力运动和抗阻运动干预12周,探索不同运动类型干预对衰老大鼠心肌细胞自噬、凋亡和细胞周期调控信号通路的作用与机制,为运动干预老年心血管疾病的预防和康复提供参考或依据。方法:取30只6月龄的雄性大鼠,饲养至21月龄以建立自然衰老大鼠模型,随机分为老年对照组（Old control group,OC组）、老年耐力运动组（Old endurance exercise group,OE组）和老年抗阻运动组（Old resistance exercise group,OR组）,每组10只;两种运动干预周期均为12周,其中OE组:给予大鼠10°坡度跑台耐力运动训练,5天/周,45 min/天（跑速为15 m/min）;OR组:给予大鼠尾部负重爬梯抗阻训练,5天/周,2组/次,每组重复3次,组内休息1 min,组间休息2 min。末次运动干预24小时后,取心肌组织样本,HE染色观察大鼠心肌形态学变化,TUNEL染色考察心肌细胞凋亡情况。Western Blot用于检测大鼠心肌细胞中相关蛋白的表达情况。另取同品系6月龄大鼠8只,作为青年对照组（Youth control group,YC组）。结果:1.HE染色:与YC组相比,OC组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞边界不清晰,心肌间质细胞明显增多。OE组与OR组大鼠的心肌细胞相对于OC组大鼠排列更加有序、细胞的边界相对明显、心肌间质细胞也有所减少。2.TUNEL染色:与YC组相比,OC组大鼠心肌中阳性细胞数极显着性增多（p<0.001）;与OC组相比,OE组与OR组大鼠心肌中阳性细胞凋亡率极大地降低（p<0.001）,运动组之间的比较,OR组大鼠心肌中阳性细胞数较OE组大鼠明显减少（p<0.05）。3.IGF-1R/PI3K/Akt/mTOR蛋白表达水平:与YC组相比,OC组大鼠心肌的IGF-1R、PI3K和p-Akt/Akt,显示老年大鼠心肌激活IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路水平低于青年组。然而与OC组相比,OE组大鼠心肌的IGF-1R和PI3K的表达量极显着性上调（p<0.001）、p-Akt/Akt表达量极显着性下调（p<0.001）,p-mTOR/mTOR的表达量显着性下调（p<0.05）;同时,与OC组相比,OR组大鼠心肌的IGF-1R和PI3K的表达量极显着性上调（p<0.001）,p-Akt/Akt表达量极显着性上调（p<0.001）。最后相比OE组,OR组大鼠心肌的IGF-1R表达量非常显着性下调（p<0.01）,PI3K的表达量显着性上调（p<0.05）,p-Akt/Akt表达量极显着性上调（p<0.001）,结果说明耐力运动与抗阻运动都可改善老年大鼠心肌IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路水平的低下,而且对比两种运动,耐运动较抗阻运动激活IGF-1R/PI3K/Akt/mTOR信号通路水平比较大。4.自噬相关蛋白表达水平:与YC组相比,OC组大鼠心肌LC3-II/LC-I的比值极显着性下降（p<0.001）,p62表达量极显着性上升（p<0.001）,显示老年大鼠心肌的自噬水平低于青年组。然而与OC组相比,OE组大鼠心肌LC3-II/LC-I的比值极显着性增加（p<0.001）,p62表达量显着性减少（p<0.05）;同时,与OC组相比,OR组大鼠心肌LC3-II/LC3-I比值非常显着性增加（p<0.01）。最后与OE组相比,OR组大鼠心肌LC3-II/LC3-I比值非常显着性下降（p<0.01）,p62表达量非常显着性上升（p<0.01）,结果说明耐力运动与抗阻运动都能改善老年大鼠心肌自噬水平低下的状态,但对比两种运动,耐力运动激活自噬水平的能力强于抗阻运动。5.凋亡相关蛋白表达水平:与YC组相比,OC组大鼠心肌的Bcl-2表达量极显着性下降（p<0.001）,Bax、Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的表达量都极显着性上升（p<0.001）,FasL的表达量显着性上升（p<0.05）,Caspase-8的表达量极显着性上升（p<0.001）,显示老年大鼠心肌的抗凋亡能力低于青年组,而老年大鼠心肌的内源性与外源凋亡水平明显高于青年组。然而与OC组相比,OE组大鼠心肌的Bcl-2表达量极显着性增加（p<0.001）,Bax的表达量显着性下降（p<0.05）,FasL和Caspase-8表达量极显着性下降（p<0.001）,Cleaved-Caspase-3的表达量非常显着性下降（p<0.01）;OR组大鼠心肌的Bcl-2表达量显着性增加（p<0.05）,Caspase-9的表达量极显着性下降（p<0.001）,FasL、Caspase-8和Cleaved-Caspase-3表达量极显着性下降（p<0.001）。对比OE组与OR组,OE组大鼠心肌的Bcl-2表达量显着性增多（p<0.05）,Caspase-9和Caspase-8的表达量极显着性增多（p<0.001）,结果说明耐力运动与抗阻运动都能降低老年大鼠心肌凋亡水平,提高抗凋亡能力,结合TUNEL染色凋亡率对比两种运动,抗阻运动的抗凋亡能力强于耐力运动。6.细胞周期相关蛋白表达水平:与YC组相比,OC组大鼠心肌的CyclinD1、CDK4和p-Rb/Rb的表达量极显着性下降（p<0.001）,p21的表达量极显着性上升（p<0.001）,显示老年大鼠心肌周期调控能力低于青年组。然而与OC组相比,OE组大鼠心肌的CyclinD1的表达量极显着性上调（p<0.001）,CDK4的表达量非常显着性上调（p<0.01）,p21的表达量极显着性下调（p<0.001）,p-Rb/Rb的表达量极显着性上调（p<0.001）。同时,与OC组相比,OR组大鼠心肌的CDK4的表达量极显着性上调（p<0.001）,p21的表达量极显着性上调（p<0.001）,p-Rb/Rb的表达量极显着性上调（p<0.001）。最后相比OE组,OR组大鼠心肌的CyclinD1的表达量极显着性下调（p<0.001）,p21的表达量极显着性上调（p<0.001）,p-Rb/Rb的表达量极显着性上调（p<0.001）,结果说明耐力运动与抗阻运动都可提高老年大鼠心肌周期调控能力,对比两种运动,抗阻运动调控老年大鼠心肌周期调控能力也强于耐力运动。结论:运动通过促进IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路激活自噬和细胞进程、以抑制凋亡机制,改善老年大鼠心肌细胞紊乱形态及不规整细胞排列,降低老年大鼠心肌细胞的凋亡。
曾志刚[7]（2019）在《IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究》文中研究表明目的:骨骼肌损伤是运动医学中最常见的损伤之一。我们之前的研究发现,巨噬细胞剔除导致挫伤骨骼肌中胰岛素样生长因子1（IGF-1）、机械生长因子（MGF）的下调和肌肉再生受损。据此我们假设,注射IGF-1或MGF可能至少部分地改善巨噬细胞剔除导致的肌肉修复受损。因此,我们探讨了注射IGF-1或MGF是否在改善受损肌肉的修复中起重要作用。方法:在C57BL/6小鼠的腓肠肌中建立了IGF-1或MGF注射的肌肉挫伤和巨噬细胞剔除的动物模型。将小鼠随机分为4组:（1）挫伤与安慰剂处理组（C组）,（2）挫伤与巨噬细胞剔除处理组（CD组）,（3）挫伤、巨噬细胞剔除与IGF-1处理组（CDI组）,（4）挫伤、巨噬细胞剔除与MGF处理组（CDM组）。在C、CD、CDI和CDM组中,除第0天（非挫伤小鼠）外,每组小鼠均产生腓肠肌双侧挫伤,并分别在挫伤前（Con）和挫伤后第1、3、7、14天取样。在巨噬细胞剔除和IGF-1或MGF注射后对挫伤的肌肉进行综合的组织形态学和遗传学分析,在挫伤骨骼肌中检测骨骼肌再生（HE染色）、纤维化（masson染色）、巨噬细胞及其亚群表面标志物、炎性细胞因子、趋化因子、肌源性调节因子（MRFs）、血管生成调节因子、氧化应激因子和基质金属蛋白酶（MMP）的表达（实时定量PCR和免疫荧光染色）。结果:1含氯膦酸盐的脂质体对受损骨骼肌巨噬细胞标志物的影响。与单纯肌肉挫伤后相比,巨噬细胞剔除后的巨噬细胞总数（F4/80）明显受到抑制（ρ<0.01）。这些结果表明巨噬细胞有效剔除了。2注射IGF-1未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的再生肌纤维减少和纤维化加重。巨噬细胞剔除后损伤14天的挫伤肌肉中再生肌纤维的总数目、总面积和总直径比单纯肌肉挫伤后的再生肌纤维显着减少（ρ<0.05）,注射IGF-1后受损的肌肉再生没有改善（ρ>0.05）。再者,巨噬细胞剔除引起肌肉挫伤后纤维化明显增加（ρ<0.05）,而增加的纤维化没有通过IGF-1注射得以改善（ρ>0.05）。3注射IGF-1未能促进巨噬细胞剔除后巨噬细胞之间的协调,从而未改善挫伤肌肉的再生和修复。通过注射IGF-1,挫伤后的细胞免疫反应得到了改善,巨噬细胞总数（F4/80）、促炎巨噬细胞（CD68）、抗炎巨噬细胞（CD163和CD206）有一定程度的显着增加（ρ<0.05）。在修复后期,注射IGF-1后的巨噬细胞总数（F4/80）高于单纯肌肉挫伤和巨噬细胞剔除后的巨噬细胞总数（F4/80）（ρ<0.05）,而注射IGF-1后的CD68和CD206巨噬细胞的水平仅高于单纯肌肉挫伤后的水平（ρ<0.05）,CD163巨噬细胞水平低于单纯肌肉挫伤后的水平（ρ<0.01）。4注射IGF-1未能改善巨噬细胞剔除所致的挫伤肌肉延迟修复（其表现为MRFs增加,特别是修复后期）。与单纯肌肉挫伤后的表达水平相比,在巨噬细胞剔除后的不同时间点,MyoD,Myf5,myogenin和Myf6的表达水平显着增加（ρ<0.05）,在注射IGF-1后14d,MyoD和myogenin的表达也显着增加（ρ<0.001）。5注射IGF-1部分改善了巨噬细胞剔除所致的血管生成调节因子的抑制,但未能改善挫伤肌肉的再生受损。与单纯肌肉挫伤后相比,在巨噬细胞剔除后修复的初始阶段HIF-1α和VEGF的表达增加（ρ<0.01）,在巨噬细胞剔除后的所有修复阶段Angpt-1的表达均低于单纯肌肉挫伤后的表达（ρ<0.01）。与巨噬细胞剔除后相比,注射IGF-1后各修复阶段HIF-1α的表达均显着降低（ρ<0.05）,VEGF在修复后期和Angpt-1在所有修复阶段的表达显着增加（ρ<0.001）。然而,注射IGF-1后修复后期HIF-1α、VEGF和Angpt-1的表达均低于单纯肌肉挫伤后的表达（ρ<0.001）。6注射MGF对巨噬细胞剔除后肌纤维再生无保护作用,但减轻挫伤骨骼肌的纤维化。巨噬细胞剔除显着降低了损伤14天后再生肌纤维的总直径、总数量和总面积（ρ<0.01）。然而,注射MGF对再生肌纤维的直径、数量和面积没有影响（ρ>0.05）。再者,与损伤后14天的单纯肌肉挫伤组纤维化比较,巨噬细胞剔除组的骨骼肌纤维化显着增加（ρ<0.01）。然而,与损伤后14天的巨噬细胞剔除组纤维化面积比较,注射MGF后纤维化面积显着降低（ρ<0.05）。同时,在损伤后1天和3天,注射MGF后I型和III型胶原蛋白水平明显低于巨噬细胞剔除后的水平（ρ<0.01）。7注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中卫星细胞的功能状态。巨噬细胞剔除不影响MyoD的表达（ρ>0.05）,但在肌肉损伤后3天显着降低Myogenin的表达（p<0.01）。然而,注射MGF并不影响巨噬细胞剔除后受损骨骼肌中MyoD和Myogenin的表达（ρ>0.05）。8注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的表达,但降低炎性细胞因子和趋化因子的表达。与巨噬细胞剔除相比,注射MGF后挫伤骨骼肌的巨噬细胞标记物表达无明显变化（ρ>0.05）。在骨骼肌损伤后3天,巨噬细胞剔除使促炎细胞因子（TNF-α,IL-1β和TGF-β）的水平显着高于单纯肌肉挫伤（ρ<0.05）。相反,与巨噬细胞剔除相比,注射MGF导致损伤后TNF-α,IFN-γ,IL-1β和TGF-β水平显着降低（ρ<0.05）。再者,巨噬细胞剔除显着增加趋化因子（CCL2、CCL5和CXCR4）的表达（ρ<0.05）。然而,注射MGF显着降低巨噬细胞剔除后受损肌肉组织三种趋化因子（CCL2,CCL5和CXCR4）的表达（ρ<0.05）。9注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中gp91phox的表达。与巨噬细胞剔除比较,注射MGF显着降低了伤后3天gp91phox的表达（ρ<0.01）。10注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌中基质金属蛋白酶的表达。巨噬细胞剔除导致损伤骨骼肌中MMP-1,MMP-2,MMP-9,MMP-10和MMP-14水平比单纯肌肉挫伤显着升高（ρ<0.05）。与巨噬细胞剔除比较,注射MGF在损伤后第3天显着抑制其增加（ρ<0.01）。结论:通过上述研究结果得出以下结论:（1）在巨噬细胞持续剔除的情况下,注射IGF-1可以促进巨噬细胞亚群（CD206）和VEGF、Angpt-1的表达的部分恢复。（2）IGF-1注射并不能完全弥补巨噬细胞在肌肉再生相关调节因子、肌源性调节因子和血管生成调节因子中的重要作用。因此,外源性补充IGF-1并不能改善由巨噬细胞剔除引起的小鼠挫伤骨骼肌的再生和修复受损。（3）注射MGF可部分改善由巨噬细胞剔除导致的小鼠骨骼肌再生受损和纤维化。（4）注射MGF降低了巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶和gp91phox的表达,有利于减少挫伤骨骼肌的纤维化。
王璐[8]（2019）在《淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究》文中研究说明干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,具有十分广阔的应用前景,已被广泛应用至多种疾病的临床研究中,但是临床上移植入体内的干细胞存活率低,限制了其推广应用。因此,亟需新的治疗策略改进干细胞抵御体内恶劣微环境的能力。天然药物独具优势,前期实验发现淫羊藿素（icaritin,ICT）预处理后的人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）治疗急性肝衰竭大鼠,死亡率进一步降低,肝脏病理、肝功能得到进一步改善,但是内在机理尚不清楚。预实验发现ICT可以增加体外培养的hUC-MSCs的细胞活力,调节多种细胞因子的分泌,并减少细胞的凋亡,电镜下可见ICT减少了自噬小体包裹的线粒体数量,因此,本研究将从细胞凋亡与线粒体自噬入手,探索淫羊藿素影响人脐带间充质干细胞的机制,为中药联合干细胞疗法提供理论依据。目的:本研究首先通过文献综述,为实验提供理论支持;随后在体外采用无血清培养部分模拟体内微循环障碍的环境,使用ICT干预hUC-MSCs,探索其是否具有抗凋亡作用,并深入研究是否通过HGF（肝细胞生长因子）/c-Met通路发挥作用;观察ICT能否干预hUC-MSCs的线粒体自噬过程;同时采用蛋白质谱,分析ICT预处理后的hUC-MSCs的差异表达蛋白,并进行GO分析、KEGG分析、蛋白互作分析等生物信息学分析,评估淫羊藿素参与的生物学过程。方法:人脐带间充质干细胞无血清培养72小时作为基本的造模方式,模拟微循环障碍的体内环境。不同浓度的ICT干预造模细胞,用MTS法测定其0D值,筛选最佳处理浓度。BrdU掺入试验检测Control组（正常培养组）、Serum free组（无血清培养组）、ICT组（淫羊藿素组）、HGF组（肝细胞生长因子组）的细胞增殖率。ELISA法检测ICT促进hUC-MSCs的HGF分泌情况。WB与qRT-PCR法检测ICT影响hUC-MSCs的c-Met受体表达情况。转染构建c-Met+MSCs,通过qRT-PCR和WB检验其转染效率。使用CCK8法筛选c-Met受体抑制剂克唑替尼（crizotinib）的最佳作用浓度。采用AnnexinV-FITC/PI凋亡检测,评估各组细胞凋亡率。qRT-PCR与WB检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Bax的表达。MTS法检测不同浓度的自噬抑制剂3MA对造模细胞的影响。使用qRT-PCR、WB以及免疫荧光显微镜检测线粒体外膜蛋白tomm20、线粒体内膜蛋白timm23、线粒体基质蛋白细胞色素c氧化酶亚基II（MT-C02）、自噬相关蛋白LC3B的表达情况。透射电镜观察各组细胞的超微结构,重点观察其线粒体自噬水平。采用qRT-PCR筛选ICT干预hUC-MSCs线粒体自噬的相关通路。使用JC-1膜电位检测试剂盒检测膜电位情况。采用蛋白质谱进行各组细胞差异蛋白的生物信息学分析。结果:1.不同浓度的淫羊藿素处理无血清培养hUC-MSCs,各处理浓度均提高了其细胞活力,但是仅50ng/ml（0.1uM）、100ng/ml具有统计学意义（P<0.05）。选择50ng/ml为最佳处理浓度进行后续实验。BrdU检测显示较Control组,Serum free组增殖率下降（P<0.05）,而使用ICT或者HGF均提高了细胞增值率（P<0.05）。2.人脐带间充质干细胞本身可分泌HGF,也表达HGF的受体c-Met,而ICT能够促进其表达更高水平的HGF与c-Met受体（P<0.05）。构建c-Met+MSCs后,WB与qRT-PCR法证实了基因转染成功。根据细胞抑制率,筛选4 u M为克唑替尼（c-Met受体抑制剂）的最佳处理浓度。MSCs在无血清培养72h时凋亡率较高,c-Met+MSCs的细胞凋亡率显着降低（P<0.01）,克唑替尼处理后,细胞凋亡率显着增高（P<0.01）,提示HGF/c-Met通路对于MSCs具有抗凋亡作用。WB显示,对比MSCs组,c-Met+MSCs组Bcl-2的表达上调且Cleaved caspase-3、Bax表达下调（P<0.05）,克唑替尼则使Bcl-2蛋白水平降低,Cleaved caspase-3和Bax蛋白表达增加,qRT-PCR验证了上述结论。提示HGF/c-Met通路通过调控凋亡蛋白的表达发挥抗凋亡作用。3.MSCs在无血清培养72h时凋亡率较高,ICT或HGF处理后,MSCs凋亡率显着降低（P<0.05）。当使用c-Met受体抑制剂克唑替尼时,拮抗了 ICT的抗凋亡作用,差异有统计学意义（P<0.01）。这表明克唑替尼可以抑制ICT对MSCs的保护作用,ICT对MSCs的抗凋亡作用与HGF/c-Met通路相关。WB显示,ICT或HGF处理后的MSCs的Bcl-2表达上调且Cleaved caspase-3、Bax表达下调（P<0.05）,对比ICT组,加用克唑替尼后可使Bcl-2蛋白水平降低,使Cleaved caspase-3和Bax蛋白的表达增加,qRT-PCR验证了上述结论。提示ICT通过HGF/c-Met通路调控凋亡蛋白的表达发挥抗凋亡作用。4.低浓度的自噬抑制剂3-MA对造模细胞的活性具有促进作用（P<0.05）,而高浓度的自噬抑制剂3-MA抑制了细胞活性（P<0.01）。提示无血清培养条件下,适度的抑制细胞自噬有利于细胞的存活,而过度的抑制细胞自噬则会降低细胞活力,不利于细胞存活。5.与Control组比较,Serum free组MSCs的线粒体外膜蛋白tomm20、线粒体内膜蛋白timm23、线粒体基质蛋白细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ（MT-C02）均会减少,自噬蛋白LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达均增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率提高,线粒体膜电位降低,提示线粒体自噬水平被上调,电镜可见细胞内“线粒体自噬体”（被自噬小体包裹的线粒体）显着增多,损伤线粒体增加,细胞形态不佳,证实了无血清培养增加了线粒体自噬;而ICT或者HGF干预后上述线粒体蛋白表达增加,自噬蛋白LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达均减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率降低,线粒体膜电位升高,提示线粒体自噬水平被下调。电镜可见胞内“线粒体自噬体”减少,损伤线粒体减少,细胞形态得到一定的改善,证实了ICT和HGF均减少了线粒体自噬。6.采用qRT-PCR进行Pink1/Parkin通路,FUNDC1通路以及Bnip3/Nix通路的筛选,结果如下:Pink1、Bnip3的mRNA与前述线粒体自噬趋势相符,Nix、FUNDC1的mRNA呈现出相矛盾的趋势。7.蛋白质谱分析:通过GO分析,发现Control组与Serum free组的差异蛋白,以及ICT组与Serum-free组之间,HGF组与Serum free组之间的差异蛋白,均参与细胞凋亡、自噬、线粒体自噬相关的生物过程（P<0.05）。对ICT组与Serum free组的差异蛋白进行分析,AKT1位于蛋白互作中心节点位置,KEGG分析PI3K-AKT通路具有统计学意义,可作为研究的重点通路。对于HGF组与Serum free组之间的差异蛋白进行分析,筛选出NF-κ B通路作为研究重点通路。结论:1.淫羊藿素能够通过HGF/c-Met通路降低无血清培养的人脐带间充质干细胞的凋亡率,与调节Cleaved Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达水平有关。2.淫羊藿素或肝细胞生长因子均可降低无血清培养的人脐带间充质干细胞的线粒体自噬水平,减少损伤线粒体数目,改善细胞形态,增加线粒体蛋白tomm20、timm23、MTC02的表达,提高线粒体膜电位。3.蛋白质谱分析发现淫羊藿素或肝细胞生长因子介导的差异蛋白参与细胞凋亡、自噬、线粒体自噬相关的生物过程,对于ICT,PI3K-AKT通路可作为研究重点通路,对于HGF,NF-κ B通路可作为研究重点。
牛小伟[9]（2019）在《当归多糖通过Oip5-as1调节SIRT1-AMPK-PGC1α通路改善心肌缺血再灌注损伤的实验研究》文中认为背景:急性心肌梗死（AMI）是在世界范围内发病率和死亡率较高的疾病之一。再灌注治疗是改善AMI患者预后的关键。但再灌注本身会增加心肌和冠脉循环的不可逆性损伤,导致梗死面积增加,即心肌缺血再灌注（MI/R）损伤。因此,在恢复心肌有效再灌注的基础上,采取能够改善MI/R损伤的心肌保护措施具有重要临床意义。许多中药在AMI中具有抗心肌缺血损伤、防止心室重构和保护心功能的作用,其中作为甘肃省道地药材的当归是常用药物之一。然而,当归对心肌保护作用的活性成分尚不明确,其发挥疗效的分子机制有待于进一步研究。目的:研究当归活性成分改善MI/R损伤的作用及分子机制。方法:1.运用网络药理学方法筛选当归对心肌保护作用的主要活性成分及可能的信号通路（第一部分）。2.采用体内外实验及分子生物学方法研究由网络药理学筛选出的当归活性成分—当归多糖（ASP）改善MI/R损伤的作用和SIRT1-AMPK-PGC1α信号机制（第二部分）。3.通过实验研究ASP对lncRNA Oip5-as1的影响及Oip5-as1对SIRT1-AMPKPGC1α信号通路的调节作用（第三部分）。结果:1.网络药理学发现ASP可能是当归保护心肌的重要活性成分,SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路是潜在作用机理。2.细胞实验发现ASP通过激活SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路发挥保护线粒体、抗氧化应激以及减少心肌细胞凋亡的作用。3.细胞实验显示ASP促进Oip5-as1的表达丰度。Oip5-as1作为竞争性内源RNA（ce RNA）调控SIRT1 m RNA的表达,进而激活SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路。4.动物实验发现ASP改善MI/R损伤,促进Oip5-as1的表达水平,上调SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路。结论:1.利用网络药理学筛选当归活性成分及其在心肌保护中的作用机制是一种可行的方法。2.ASP通过上调Oip5-as1表达,激活SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路,从而缓解氧化应激,抑制线粒体凋亡途径,最终减少细胞凋亡,改善MI/R损伤。
苏云术[10]（2019）在《Trop2在骨密质来源干细胞修复心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究》文中研究说明目的:冠心病发病率逐年攀升,严重威胁人类健康,干细胞治疗心肌缺血再灌注损伤（I/R）的研究前景广阔,骨密质来源干细胞（cortical bone-derived stem cells,CBSCs）被认为具有明确的心肌保护作用,但其作用机制不甚明确,Trop2是一个在肿瘤细胞和干细胞中高表达的基因,其可能在调节细胞增殖、迁移以及自我更新方面发挥重要作用,但其是否在CBSCs抗心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用,及其作用机制仍不清楚,本研究旨在阐明Trop2在CBSCs抗心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法:1.分离小鼠CBSCs并体外培养、诱导分化、表型鉴定。2.建立小鼠心肌缺血再灌注模型,采用CBSCs心肌内注射的方式进行治疗,以野生型CBSCs作为对照组,观察Trop2功能缺失对CBSCs治疗效果的影响。3.建立小鼠心肌缺血再灌注模型,观察Trop2功能缺失对于CBSCs抗凋亡、促血管生成作用的影响。4.建立过氧化氢刺激诱导细胞损伤的体外模型,观察Trop2基因对于CBSCs体外作用的影响,并进一步阐明其作用机制结果:1.CBSCs心肌内注射可明显改善心肌缺血再灌注损伤,Trop2功能缺失减弱了这种治疗作用。2.Trop2功能缺失导致CBSCs的促新生血管生成作用减弱。3.Trop2功能缺失导致CBSCs的旁分泌减弱,进而减弱其治疗作用。4.AKT,GSK3β及β-Catenin信号通路在Trop2参与的CBSCs治疗过程中发挥作用。5.Trop2与PIP2结合,通过诱导其水解活化为IP3,进而促进Akt的磷酸化。结论:Trop2的正常表达对于维持CBSCs抗心肌缺血再灌注损伤意义重大,其通过结合PIP2,诱导其水解活化,并进一步通过AKT,GSK3β及β-Catenin信号通路影响CBSCs的旁分泌及促新生血管形成。
二、胰岛素样生长因子Ⅰ的抗心肌细胞凋亡作用(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胰岛素样生长因子Ⅰ的抗心肌细胞凋亡作用(英文)（论文提纲范文）
（1）长链非编码RNA XIST在心肌肥厚中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 综述 长链非编码RNA在心力衰竭中的研究进展 |
| 1 心力衰竭的发病机制 |
| 1.1 心力衰竭与心肌肥厚 |
| 1.1.1 生理性心肌肥厚 |
| 1.1.2 病理性心肌肥厚 |
| 1.1.3 生理性心肌肥厚和病理性心肌肥厚之间的相互关系 |
| 1.2 心力衰竭与心肌纤维化 |
| 1.3 心力衰竭与心肌细胞凋亡 |
| 2 长链非编码RNA |
| 2.1 LncRNAs的分类 |
| 2.2 LncRNAs的分子功能 |
| 3 LncRNAs与心力衰竭 |
| 3.1 LncRNAs与心肌肥厚 |
| 3.2 LncRNAs与心肌纤维化 |
| 3.3 LncRNAs与心肌细胞凋亡 |
| 第二章 实验研究 |
| 1 LncRNA XIST对心肌肥大的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器与器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 溶液的配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学处理 |
| 1.7 实验结果 |
| 1.8 讨论 |
| 2 LncRNA XIST通过miR-126a调控心肌肥大 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验仪器与器材 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 溶液的配制 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.6 统计学处理 |
| 2.7 实验结果 |
| 2.8 讨论 |
| 3 XIST通过miR-126a/IGF-1/Akt信号通路调控心肌细胞肥大 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验仪器与器材 |
| 3.3 实验试剂 |
| 3.4 溶液的配制 |
| 3.5 实验方法 |
| 3.6 统计学处理 |
| 3.7 实验结果 |
| 3.8 讨论 |
| 第三章 结论 |
| 参考文献 |
| 在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）基于优化算法的痰瘀同治方抗心肌缺血再灌注损伤分子网络机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药抗心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药复方的网络药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 网络药理学算法在中医药领域的应用现状 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 临床研究 |
| 1 痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 1.1 MI/RI靶点的收集与整理 |
| 1.2 痰瘀同治方中药活性成分及其靶点的收集与整理 |
| 1.3 痰瘀同治方中药活性成分抗MI/RI的核心靶点的筛选 |
| 1.4 构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”分子网络并计算中药活性成分的网络效力值 |
| 1.5 痰瘀同治方抗MI/RI核心靶点的富集分析 |
| 1.6 小结 |
| 2 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法 |
| 2.1 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的基本原理与优势 |
| 2.2 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的公式 |
| 2.3 小结 |
| 3 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 3.1 基于优化算法构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的核心网络 |
| 3.2 基于优化算法构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的核心网络靶点的富集分析 |
| 3.3 小结 |
| 4 对平均最短路径偏向的重启随机游走算法的验证 |
| 4.1 痰瘀同治方核心中药活性成分与MI/RI关键靶点的分子对接 |
| 4.2 应用优化算法前后痰瘀同治方抗MI/RI靶点数量及富集分析路径的对比 |
| 4.3 基于优化算法的痰瘀同治方抗MI/RI靶点富集分析结果与课题组前期研究结果的对比 |
| 4.4 小结 |
| 5 痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 5.1 痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 5.2 痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 讨论 |
| 1 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法 |
| 1.1 有偏向的重启随机游走算法中对偏向概率参数的筛选 |
| 1.2 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法与其它算法的对比与分析 |
| 1.3 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法与随机游走算法的对比与分析 |
| 1.4 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的适用性及其不足 |
| 2 痰瘀同治方抗MI/RI的核心中药活性成分及其核心中药 |
| 3 痰瘀同治方、本方祛痰中药组和本方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制的对比与分析 |
| 3.1 痰瘀同治方与本方祛痰中药组共同抗MI/RI的分子网络机制 |
| 3.2 痰瘀同治方与本方化瘀中药组共同抗MI/RI的分子网络机制 |
| 3.3 痰瘀同治方、本方祛痰中药组和本方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制的对比研究 |
| 4 痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 4.1 痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 4.2 痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 4.3 痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
（3）基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 糖尿病心肌病的中医认识 |
| 1 糖尿病心肌病中医病名 |
| 2 糖尿病心肌病中医病因 |
| 3 糖尿病心肌病中医病机 |
| 4 糖尿病心肌病治则 |
| 5 糖尿病心肌病论治 |
| 6 小结与展望 |
| 综述二 糖尿病心肌病现代研究进展 |
| 1 糖尿病心肌病流行现状 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理机制 |
| 4 糖尿病心肌病诊断策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干预策略 |
| 6 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖心平胶囊网络药理学研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 糖心平胶囊对DCM的保护作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 糖心平干预后大鼠心功能及对抗急性心肌缺血能力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 基于PI3K/AKT信号通路糖心平胶囊药效机制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（4）基于靶点预测和高通量测序的丹蒌片干预稳定型心绞痛作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 丹蒌片干预冠心病的药理作用研究 |
| 1 心肌缺血损伤的保护作用 |
| 2 降低血清炎症因子水平 |
| 3 改善脂质代谢紊乱 |
| 4 改善血管内皮功能 |
| 5 稳定动脉粥样硬化斑块 |
| 6 促进或抑制细胞凋亡 |
| 7 改善心室重构 |
| 8 调节心率失常 |
| 9 总结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 丹蒌片干预稳定型心绞痛的“成分-靶点”网络预测 |
| 第一节 材料与方法 |
| 1 TCMSP数据库检索丹蒌片活性成分 |
| 2 系统文献检索补充丹蒌片活性成分 |
| 3 资料提取与数据统一 |
| 4 丹蒌片成分对应靶点检索 |
| 5 稳定型心绞痛疾病靶点检索 |
| 6 构建丹蒌片干预稳定型心绞痛“成分-靶点”网络 |
| 7 丹蒌片干预稳定型心绞痛的PPI网络 |
| 第二节 结果 |
| 1 丹蒌片主要活性成分获取 |
| 2 丹蒌片主要成分对应靶点获取 |
| 3 稳定型心绞痛疾病靶点获取 |
| 4 丹蒌片干预稳定型心绞痛的“成分-靶点” |
| 5 丹蒌片干预稳定型心绞痛的PPI网络 |
| 第三节 讨论 |
| 第四节 小结 |
| 第三章 丹蒌片中药四性的分类功能富集 |
| 第一节 材料与方法 |
| 1 丹蒌片组方的四性分类 |
| 2 丹蒌片中药四性的功能富集 |
| 第二节 结果 |
| 1 丹蒌片寒药的功能富集 |
| 2 丹蒌片凉药的功能富集 |
| 3 丹蒌片温药的功能富集 |
| 第三节 讨论 |
| 第四节 小结 |
| 第四章 丹蒌片干预稳定型心绞痛痰瘀互结证的差异基因检测 |
| 第一节 材料与方法 |
| 1 病例采集 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳排标准 |
| 4 样本量估算 |
| 5 治疗方案 |
| 6 疗效判定标准 |
| 7 样本采集与分析 |
| 第二节 结果 |
| 1 干预前患者基本资料比较 |
| 2 干预后患者中医疗效评价分析 |
| 3 干预前后基因表达谱测序结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第四节 小结 |
| 结语 |
| 研究成果 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）Lnc00839通过miR-19-3p/IGF-1分子轴对阴道壁成纤维细胞COL-1分泌影响及其分子机制探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:Lnc00839 激活IGF-1 促进成纤维细胞COL-1 分泌 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试剂与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配置 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 qRT-PCR检测m RNA表达水平 |
| 2.2.2 Western-blot |
| 2.2.3 细胞荧光原位杂交实验 |
| 2.2.4 细胞原代培养及纯化 |
| 2.2.5 细胞传代培养、冻存及复苏 |
| 2.2.7 ELISA |
| 2.2.8 细胞转染 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 Lnc00839在POP患者中的表达降低 |
| 3.1.1 PCR检测两组间Lnc00839 表达差异 |
| 3.1.2 荧光原位杂交检测两组间表达差异 |
| 3.2 Lnc00839 降低与POP-Q评分相关性分析 |
| 3.3 在POP患者阴道壁组织中,IGF-1 及其受体中表达降低,COL-1 型胶原分泌减少,二者呈正相关 |
| 3.4 POP患者自噬与凋亡水平升高 |
| 3.4.1 TUNEL检测POP患者中凋亡水平增加 |
| 3.4.2 Western-blot检测自噬标记物 |
| 3.4.3 Western-blot检测凋亡标记物 |
| 3.5 IGF-1 可促进成纤维细胞的COL-1 分泌。IGF-1 可抑制自噬标记物表达水平 |
| 3.6 Lnc00839 可上调IGF-1 的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:Lnc00839 通过mi R-19-3p调控IGF-1 促进成纤维细胞COL-1 型胶原分泌 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配置 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学预测 |
| 2.2.2 细胞复苏 |
| 2.2.3 组织RNA提取及PCR检测 |
| 2.2.4 细胞RNA提取及PCR |
| 2.2.5 细胞荧光原位杂交实验 |
| 2.2.6 细胞转染 |
| 2.2.7 双荧光素酶实验 |
| 2.2.8 Western-blot |
| 2.2.9 流式检测凋亡 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物信息学预测LncRNA及靶向miRNA |
| 3.2 miR-19-3p在脱垂组织中的表达 |
| 3.2.1 PCR检测两组间miR-19-3p的表达差异 |
| 3.2.2 荧光原位杂交检测两组间mi R-19-3p的表达情况 |
| 3.3 Lnc00839与miR-19-3p的相互作用 |
| 3.3.1 Lnc00839 抑制mi R-19-3p表达 |
| 3.3.2 双荧光素酶实验验证Lnc00839与miR-19-3p的靶向关系 |
| 3.3.3 Lnc00839 通过miR-19-3p上调成纤维细胞IGF-1 表达促进COL-1 分泌 |
| 3.4 miR-19-3p靶向作用于IGF-1 |
| 3.4.1 PCR鉴定转染效果 |
| 3.4.2 miR-19-3p对成纤维细胞IGF-1 表达的影响 |
| 3.4.3 双荧光素酶实验验证miR-19-3p与 IGF-1 的靶向关系 |
| 3.5 miR-19-3p激活POP患者成纤维细胞自噬水平,促进细胞凋亡 |
| 3.5.1 PCR鉴定转染效果 |
| 3.5.2 miR-19-3p对成纤维细胞自噬水平的影响 |
| 3.5.3 miR-19-3p对成纤维细胞凋亡水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:Lnc00839 通过miR-19-3p/IGF-1 分子轴调控AKT-mTOR-p70s6k通路促进阴道壁成纤维细胞COL-1 分泌 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配置 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 western-blot |
| 2.2.2 ELISA |
| 2.2.3 细胞转染 |
| 2.2.4 RT-PCR |
| 2.3 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 脱垂组及对照组中AKT-mTOR-p70s6k通路蛋白表达情况 |
| 3.2 IGF-1 通过AKT-mTOR-p70s6k通路调控COL-1 的分泌 |
| 3.3 Lnc00839 通过miR-19-3p/IGF-1 分子轴激活AKT-mTOR-p70S6K通路 |
| 3.4 Lnc00839 激活AKT-mTOR-p70S6K通路抑制自噬促进阴道壁成纤维细胞COL-1 分泌 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 胰岛素样生长因子(IGF-1)在盆底功能障碍相关疾病中的作用及机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）运动通过IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路激活延缓衰老大鼠心肌细胞凋亡的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 引言 |
| 第二章 文献综述 |
| 2.1 心脏老化与心肌细胞衰老 |
| 2.2 心肌细胞衰老的相关机制 |
| 2.2.1 胰岛素生长因子受体通路激活自噬与心肌衰老 |
| 2.2.2 胰岛素生长因子受体通路抑制凋亡与心肌衰老 |
| 2.2.3 胰岛素生长因子受体通路调控细胞周期进程与心肌衰老 |
| 2.3 运动干预对衰老心肌细胞的保护作用与机制 |
| 2.3.1 运动激活IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路保护衰老心肌细胞 |
| 2.3.2 运动激活自噬有利于衰老心肌细胞存活 |
| 2.3.3 运动抑制凋亡促进老年心肌保护 |
| 2.3.4 运动调控细胞周期调控系统促进衰老心肌细胞存活 |
| 第三章 实验对象及方法 |
| 3.1 技术路线 |
| 3.2 实验对象 |
| 3.3 主要仪器 |
| 3.4 实验试剂 |
| 3.5 实验分组 |
| 3.6 实验动物的运动干预 |
| 3.7 实验小鼠取材 |
| 3.7.1 组织样品的取材 |
| 3.7.2 心肌组织样品的制备 |
| 3.8 实验方法 |
| 3.8.1 石蜡包埋HE染色 |
| 3.8.2 TUNEL染色 |
| 3.8.3 蛋白质免疫印迹实验 |
| 3.9 数据处理 |
| 第四章 实验结果 |
| 4.1 运动干预可改善老年大鼠心肌结构 |
| 4.2 运动干预抑制老年大鼠心肌凋亡 |
| 4.3 运动介导IGF-1/PI3K/Akt/mTOR通路调控自噬、凋亡及细胞周期进程 |
| 4.3.1 运动上调IGF-1/PI3K/Akt/mTOR通路 |
| 4.3.2 运动激活老年大鼠心肌自噬 |
| 4.3.3 运动抑制老年大鼠心肌凋亡 |
| 4.3.4 运动促进细胞周期进程 |
| 第五章 分析与讨论 |
| 5.1 运动干预可激活衰老心肌细胞的自噬流通量 |
| 5.2 运动干预抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡 |
| 5.3 运动调控衰老心肌细胞进程 |
| 5.4 适度耐力运动和抗阻运动均可保护大鼠衰老心肌细胞 |
| 结论 |
| 1、主要结论 |
| 2、创新点 |
| 3、缺陷和不足 |
| 4、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 论文总体设计 |
| 第一部分 IGF-1或MGF和巨噬细胞介导的损伤骨骼肌再生的关系研究综述 |
| 1 前言 |
| 2 巨噬细胞及其亚群和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 2.1 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 2.2 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌肌再生调节因子 |
| 2.3 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 2.4 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌趋化因子 |
| 2.5 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 2.6 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 2.7 在肌再生中巨噬细胞和骨骼肌氧化应激因子 |
| 3 IGF-1和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 3.1 在肌再生中IGF-1和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 3.2 在肌再生中IGF-1和巨噬细胞及其亚群 |
| 3.3 在肌再生中IGF-1和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 3.4 在肌再生中IGF-1和骨骼肌趋化因子 |
| 3.5 在肌再生中IGF-1和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 3.6 在肌再生中IGF-1和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 4 MGF和损伤骨骼肌的再生与修复 |
| 4.1 在肌再生中MGF和骨骼肌肌源性调节因子 |
| 4.2 在肌再生中MGF和巨噬细胞及其亚群 |
| 4.3 在肌再生中MGF和骨骼肌炎症性细胞因子 |
| 4.4 在肌再生中MGF和骨骼肌血管再生调节因子 |
| 4.5 在肌再生中MGF和骨骼肌基质金属蛋白酶 |
| 第二部分 注射IGF-1未改善巨噬细胞剔除所致的骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 骨骼肌挫伤动物模型 |
| 2.4 脂质体注射 |
| 2.5 IGF-1注射 |
| 2.6 肌肉再生和纤维化的组织形态学评价 |
| 2.7 免疫荧光染色 |
| 2.8 RNA分离与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) |
| 2.9 实时定量PCR(Rt-qPCR) |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌再生的影响 |
| 3.2 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌纤维化的影响 |
| 3.3 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞及其亚型的影响 |
| 3.4 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌源性调节因子的影响 |
| 3.5 注射IGF-1对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌血管生成调节因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 注射IGF-1未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的再生肌纤维减少 |
| 4.2 注射 IGF-1 未能改善由巨噬细胞剔除引起的挫伤肌肉的延迟修复(其取决于MRFs 增加),特别是在修复的后期 |
| 4.3 注射 IGF-1 未改善挫伤肌肉中巨噬细胞剔除所致的肌肉纤维化加重 |
| 4.4 注射 IGF-1 未能促进巨噬细胞剔除后巨噬细胞亚群之间的协调,从而未改善挫伤肌肉的再生和修复 |
| 4.5 注射IGF-1部分改善了巨噬细胞剔除诱导的血管生成调节因子的抑制,但不能改善挫伤肌肉受损的再生和修复 |
| 5 结论 |
| 第三部分 注射 MGF 对巨噬细胞剔除所致的骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 骨骼肌挫伤模型 |
| 2.3 巨噬细胞剔除 |
| 2.4 MGF处理 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 Masson三色染色 |
| 2.7 免疫荧光染色 |
| 2.8 RNA提取,cDNA合成和实时聚合酶链式反应(PCR) |
| 2.9 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌肌再生的影响 |
| 3.2 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌纤维化的影响 |
| 3.3 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌卫星细胞功能状态的影响 |
| 3.4 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的影响 |
| 3.5 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子的影响 |
| 3.6 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌趋化因子的影响 |
| 3.7 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌基质金属蛋白酶的影响 |
| 3.8 注射MGF对巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌gp91phox的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 注射MGF对巨噬细胞剔除后肌纤维再生无改善作用,但能减轻巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌的纤维化 |
| 4.2 注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌卫星细胞的功能状态 |
| 4.3 注射MGF不影响巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌巨噬细胞标志物的表达 |
| 4.4 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌炎性细胞因子的表达 |
| 4.5 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌趋化因子的表达 |
| 4.6 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌基质金属蛋白酶的表达 |
| 4.7 注射MGF降低巨噬细胞剔除后挫伤骨骼肌gp91phox的表达 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 缩略词表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间科研与发表论文情况 |
（8）淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 研究背景 |
| 一、补肾中药调控干细胞的相关研究 |
| 1. 淫羊藿对干细胞的调控 |
| 2. 其他补肾中药对干细胞的调控 |
| 二、HGF在干细胞领域的研究进展 |
| 1. HGF的概述 |
| 2. HGF对干细胞的影响 |
| 三、线粒体自噬的研究进展 |
| 1. 线粒体自噬的概述 |
| 2. 中药调控线粒体自噬 |
| 第二部分 淫羊藿素通过HGF/c-Met通路增强人脐带间充质干细胞抗凋亡能力的实验研究 |
| 一、实验材料 |
| 1. 实验细胞 |
| 2. 实验仪器 |
| 3. 实验试剂与耗材 |
| 4. 主要试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| 1. 细胞培养 |
| 2. MTS法测细胞活力 |
| 3. CCK8法测细胞活力 |
| 4. BrdU掺入试验测细胞增殖率 |
| 5. 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 6. western blot(化学)方法检测蛋白表达 |
| 7. qRT-PCR检测mRNA表达水平 |
| 8. 质粒提取与细胞转染 |
| 9. ELISA法测蛋白表达 |
| 10. 统计学方法 |
| 三、实验结果 |
| 1. 淫羊藿素促进人脐带间充质干细胞的细胞活力与增殖活性 |
| 2. HGF/c-Met通路在人脐带间充质干细胞中具有抗凋亡作用 |
| 3. 淫羊藿素通过HGF/c-Met通路抑制人脐带间充质干细胞凋亡 |
| 四、讨论 |
| 第三部分 淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞线粒体自噬的实验研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 1. MTS法测细胞活力 |
| 2. western blot(荧光)方法检测蛋白表达 |
| 3. qRT-PCR检测mRNA表达水平 |
| 4. MitoTracker与目标蛋白共标记进行免疫荧光显微镜检测 |
| 5. 线粒体膜电位检测(JC-1) |
| 6. 电镜检测 |
| 7. 统计学方法 |
| 三、实验结果 |
| 1. 自噬抑制剂3-MA对无血清培养人脐带间充质干细胞的影响 |
| 2. 淫羊藿素增加无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体蛋白 |
| 3. 淫羊藿素抑制无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体自噬 |
| 4. 淫羊藿素提高无血清培养人脐带间充质干细胞的线粒体膜电位 |
| 四、讨论 |
| 第四部分 淫羊藿素预处理人脐带间充质干细胞蛋白质组学分析 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 1. 蛋白浓度测定结果 |
| 2. 差异蛋白筛选结果 |
| 3. 生物信息学分析 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）当归多糖通过Oip5-as1调节SIRT1-AMPK-PGC1α通路改善心肌缺血再灌注损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 :基于网络药理学方法探索当归对心肌保护作用的活性成分 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 资料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第二部分 :SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路介导当归多糖抗心肌缺血再灌注损伤的作用 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第三部分 :当归多糖通过Oip5-as1 调控SIRT1-AMPK-PGC1α信号通路改善心肌缺血再灌注损伤的机制研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）Trop2在骨密质来源干细胞修复心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 全文主要缩略词中英文对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 小鼠骨密质来源干细胞的分离、培养及鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.CBSCs的分离及培养 |
| 2.CBSCs的表型鉴定 |
| 3.CBSCs的诱导成骨和成脂分化 |
| 讨论 |
| 第二部分 TROP2在CBSCS中表达水平的变化对其抗缺血再灌注损伤效应的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.Trop2 基因敲除小鼠的构建 |
| 2.Trop2 缺乏降低了CBSCs在受损伤区域的定植 |
| 3.Trop2 缺乏降低了CBSCs对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 4.Trop2 促进VEGF和 FGF-2 的产生以加速血管生成 |
| 讨论 |
| 第三部分 TROP2在CBSCS心肌保护中发挥作用的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1.体外研究表明Trop2 的缺失减弱了CBSCs抗心肌损伤的能力 |
| 2.Trop2 缺失抑制了CBSCs细胞Akt及 GSK3β的磷酸化 |
| 3.Trop2 缺失削弱了CBSCs自身的抗损伤能力 |
| 4..Trop2 结合PIP2 并促进其活化,进而激活Akt磷酸化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 综述:干细胞治疗心脏损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文目录 |
| 致谢 |
四、胰岛素样生长因子Ⅰ的抗心肌细胞凋亡作用(英文)（论文参考文献）
- [1]长链非编码RNA XIST在心肌肥厚中的作用及机制研究[D]. 赵卓. 吉林大学, 2021(01)
- [2]基于优化算法的痰瘀同治方抗心肌缺血再灌注损伤分子网络机制研究[D]. 高宏杰. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制[D]. 李晓文. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]基于靶点预测和高通量测序的丹蒌片干预稳定型心绞痛作用机制研究[D]. 谌子诺. 北京中医药大学, 2021(08)
- [5]Lnc00839通过miR-19-3p/IGF-1分子轴对阴道壁成纤维细胞COL-1分泌影响及其分子机制探究[D]. 尹一童. 中国医科大学, 2021(02)
- [6]运动通过IGF-1/PI3K/Akt/mTOR信号通路激活延缓衰老大鼠心肌细胞凋亡的机制[D]. 谢金凤. 武汉体育学院, 2020(10)
- [7]IGF-1和MGF干预对巨噬细胞剔除所致骨骼肌再生受损的影响及其作用机制研究[D]. 曾志刚. 上海体育学院, 2019
- [8]淫羊藿素调控人脐带间充质干细胞的凋亡及线粒体自噬的机理研究[D]. 王璐. 广州中医药大学, 2019(08)
- [9]当归多糖通过Oip5-as1调节SIRT1-AMPK-PGC1α通路改善心肌缺血再灌注损伤的实验研究[D]. 牛小伟. 兰州大学, 2019(02)
- [10]Trop2在骨密质来源干细胞修复心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究[D]. 苏云术. 华中科技大学, 2019(03)