一、重组人生长激素对肾癌细胞株作用的研究（论文文献综述）
张凯宁[1]（2021）在《rhGH-Fc中试条件优化及其主要指标检测方法建立》文中进行了进一步梳理重组人生长激素（recombinant Human Growth Hormone,rh GH）通过促进蛋白质的合成、影响脂肪和矿物质的代谢等方式促进骨骼、内脏和全身生长,在人体生长发育中起着关键性作用,在儿科医疗、生殖、烧伤及抗衰老领域已经广泛应用于临床。重组人生长激素-受体融合蛋白（rhGH-Fc）是一种将生长激素与经过改造后的人抗体Fc段连接的融合蛋白,其保留了rh GH的生物学活性,还具有一些抗体的性质,可以减少溶酶体的降解,显着增加了rh GH的生物半衰期。该融合蛋白的表达生产面临因为需要进行后加工和糖基化修饰,不能利用原核表达系统制备;通过真核表达系统制备表达量低,生产成本高昂等问题。本研究以稳定表达rhGh-Fc蛋白的中华仓鼠卵巢上皮细胞（Chinese hamster ovary,CHO）工程细胞株CHO-K1（真核表达体系）作为研究目标,使用中试规模14 L生物反应器探讨不同搅拌速度与通气方式对融合蛋白rhGH-Fc表达量影响,获得rhGH-Fc最佳培养工艺。通过最佳培养工艺生产具有较长半衰期的rhGH-Fc,以期降低其生产成本。然后使用液相色谱-质谱联用（GC-MS）技术初步建立rhGH-Fc分子量、糖基化修饰和二硫键等指标的检测方法。首先,利用14 L生物反应器,以原有发酵工艺作为对照（STD-1）,通过改变搅拌速度以及通气方式（大泡通气和微泡通气）分别设计三组发酵工艺（STD-2、STD-3、STD-4）,通过跟踪发酵罐培养过程中细胞密度、渗透压、比耗糖量、乳酸浓度以及铵离子浓度变化,对融合蛋白rhGH-Fc培养工艺进行了优化。研究结果表明,大泡通气的STD-4培养发酵组乳酸浓度和渗透压水平明显优于其它组,且该组最终获得rhGH-Fc 0.9 g/L,比原工艺表达量提升约34%（STD-4工艺条件:温度:37℃（0–6 d）、33℃（7-14 d）;溶氧:40%;p H:6.9（0-3 d）、6.82（4-14 d）;搅拌速度:75 rpm（0-3 d）、110 rpm（4-7 d）、130rpm（8-14 d）;通气:大泡通气0.02 L/min（0-7 d）、0.05 L/min（8-14 d））。其次,将纯化后的目的蛋白进行前处理后,使用GC-MS技术初步成功建立了rhGH-Fc分子量、糖基化修饰以及二硫键的检测方法。GC-MS检测结果表明:rhGH-Fc分子量为97348.8 Da,与理论值一致;rhGH-Fc的糖基化修饰测定结果标明,其唾液酸化糖型含量为0.53%、去岩藻糖化糖型含量为8.77%、高甘露糖糖型含量为5.76%;rhGH-Fc共含有10条二硫键,分别对应rh GH段上的C51-C165一条、C182-C189一条,与Fc链上连接的C245-C305一条、C351-C409一条（因Fc与两分子的rh GH结合,总数8条）,最后两条分别位于Fc链间的C210-C210与C213-C213,与发表文献结果一致。本研究通过简单的培养条件改变降低了rhGH-Fc生产成本;并利用GC-MS建立了其发挥活性作用相关修饰集团与保持立体构造二硫键位置的检测方法,为其它相关融合蛋白的工艺优化提供借鉴,也为该蛋白结构的进一步分析与相关临床研究奠定基础。
周珍如[2]（2020）在《重组人生长激素及其突变体的表达、纯化和活性研究》文中研究表明人生长激素（hGH）是由下丘脑垂体前叶所分泌的一种重要的蛋白质激素,在细胞增殖和代谢等多种生命活动中发挥着关键作用,主要用于治疗矮小症。目前,市场上重组人生长激素（rhGH）的造价高,临床治疗也存在着各种各样的缺陷,比如依从性差、活性低、出现过敏等不良反应。因此,获取高表达量、高活性的rhGH对于降低工业生产成本和提高临床药效具有重要意义。针对目前存在的问题,本课题围绕生长激素开展了以下四个方面的研究:1.生长激素的基因筛查我们从部分人群的漱口水样本中,对编码生长激素的基因进行了初步筛查,结果表明,样品中编码生长激素的外显子碱基序列相同,提示人生长激素基因序列具有相对的保守性。因此,生物合成人源的生长激素并进行外源性补充具有重要意义。2.重组人生长激素在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化和结构表征为了提高rhGH的体外表达量,我们在hGH基因的N端插入了引导肽序列,成功构建了rhGH分泌型表达菌株,并实现了可溶性表达。经过培养条件优化后,得到了表达量为800μg/m L的rhGH,其纯度可达90%以上;对rhGH进行了SDS-PAGE、Western blot、HPLC、CD和蛋白质质谱分析,证明表达的蛋白与天然人生长激素的结构一致。3.生长激素突变体在大肠杆菌中的表达、纯化及结构表征为了获取高活性的rhGH,我们对hGH的三维结构中关键的氨基酸残基进行了定点突变,成功克隆了6个突变体基因,并获得6种生长激素突变体蛋白。基因测序、Western blot和蛋白质质谱分析结果表明,突变体蛋白的序列正确,突变成功。4.重组人生长激素及其突变体的活性研究我们采用细胞和斑马鱼模型,对野生型和突变型生长激素进行了活性评价。与野生型相比,突变体F176Y和Q46W对MC3T3-E1细胞具有更强的促增殖作用;同时,对斑马鱼节间血管和肠下血管也具有更强的促生长作用。小结:本论文通过初步的基因筛查,发现人生长激素基因序列具有相对的保守性,提示补充外源性生长激素具有重要的意义;报道了一种简单有效的方法,可用于rhGH在大肠杆菌中克隆、表达和纯化。本文成功在大肠杆菌细胞周质中实现了野生型rhGH及其六种突变体的可溶性表达并进行了相关活性研究,其中突变体F176Y、Q46W表现出良好的生物活性。本课题为rhGH的工业化生产奠定了基础,也为生长激素突变体设计提供了理论依据。
谢传昊[3]（2019）在《生长激素受体、胰岛素样生长因子-1受体、表皮生长因子受体在肾透明细胞癌中的表达及其意义》文中提出目的:研究生长激素受体（GHR）、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和表皮生长因子受体（EGFR）在肾透明细胞癌组织和癌旁正常组织中的表达情况和相关性,以及表达情况与临床病理的关系,探讨GHR、IGF-1R、EGFR对肾透明细胞癌的临床意义。方法:采用免疫组化ABC法检测64例肾透明细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织的生长激素受体（GHR）、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和表皮生长因子受体（EGFR）的表达情况,分析GHR、IGF-1R和EGFR的表达情况与肾透明细胞癌患者的年龄、性别以及肿瘤的病理分级、临床分期及肿瘤发生、发展和转移的关系以及它们之间的相关性。结果:GHR在肾透明细胞癌癌组织及癌旁正常组织的阳性表达百分率分别为62.50%（40,64）和43.75%（28,64）,癌组织明显高于癌旁正常组织（p=0.034）;IGF-1R在肾透明细胞癌癌组织和癌旁正常组织的阳性表达百分率分别为75.00%（48,64）和54.69%（35,64）,癌组织和癌旁正常组织差异有统计学意义（p=0.016）;EGFR在肾透明细胞癌癌组织及癌旁正常组织的阳性表达百分率分别为73.44%（47,64）和53.13%（34,64）,癌旁正常组织显着低于癌组织（p=0.014）;且GHR、IGF-1R和EGFR在肾透明细胞癌癌组织和癌旁正常组织的表达水平与肿瘤的病理分级和临床分期有关（p均<0.05）,与年龄及性别无相关性（p均>0.05）。GHR和IGF-1R、GHR和EGFR及IGF-1R和EGFR在肾透明细胞癌癌组织及癌旁正常组织中的表达显着相关（p均<0.05）。结论:GHR、IGF-1R和EGFR在肾透明细胞癌中的表达比在癌旁正常组织中的表达明显升高,提示GHR、IGF-1R、EGFR对肾透明细胞癌的增殖和进展起重要作用,为以GHR、IGF-1R、EGFR为靶点的肾透明细胞癌的靶向治疗治疗提供思路和理论依据。
朱俊栋[4]（2018）在《四跨膜蛋白CD82/KAI1通过调控TGF-β1/Smad通路抑制肾癌迁移侵袭的研究》文中研究说明背景:肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系统三大肿瘤之一,近年来其发病率呈逐渐上升的态势。四跨膜蛋白CD82分子在多种恶性肿瘤细胞中有表达下调的趋势,其也被认为是多种肿瘤的转移抑制因子。然而,CD82在RCC中的功能及其潜在抗转移作用机制尚不清楚。因此本研究拟测定RCC中CD82的表达含量并探索它在RCC细胞系中的调控机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应（quantitative real time-polymerase chain reaction,q RT-PCR）和免疫印迹（Western Blot）的方法检测30对RCC组织和癌旁组织以及人RCC细胞系和正常肾小管上皮细胞系HK-2中CD82的信使RNA（messenger RNA,m RNA）和蛋白的表达水平。用慢病毒和小干扰RNA（si RNA）过表达或敲低肾癌细胞系Caki-1和786-O细胞中CD82表达量后,进行Transwell穿膜实验和CCK-8（Cell Counting Kit-8）增殖实验以确定肾癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力改变。通过组织芯片和免疫组织化学技术对133例RCC组织样品进行CD82蛋白的检测,并根据肾癌术后病人的临床信息及随访数据,进行Kaplan-Meier生存曲线分析以评估CD82与肾癌患者预后之间的相关性。结果:定量PCR和免疫印迹的结果表明,与癌旁正常组织和正常肾小管上皮细胞HK-2相比,RCC组织和RCC细胞系中CD82的表达呈显着低表达。对133例的肾癌患者标本资料进行分析后发现,CD82蛋白表达阳性率为25.6%（34/133）,其阳性表达与组织学分级（P=0.041）,肿瘤分期（P=0.036）和肿瘤大小（P=0.020）显着相关。此外,体外细胞功能实验证实,过表达CD82能明显抑制Caki-1细胞的迁移侵袭能力,敲低CD82能显着增强786-O细胞的迁移侵袭能力;而肿瘤的细胞的增殖能力未有明显改变。机制研究表明,上调CD82能够通过下调TGF-β1的蛋白表达水平从而弱化TGF-β1/Smad通路的磷酸化,影响MMP家族相关蛋白的表达程度,从而抑制RCC细胞的迁移侵袭能力。挽救性实验表明,在RCC细胞中过表达CD82的基础上,加入重组人细胞因子TGF-β1（Rh TGF-β1）的刺激使TGF-β1蛋白的表达水平得到恢复,能够逆转先前被CD82抑制的肿瘤生物学行为,同时TGF-β1/Smad通路的磷酸化水平也重新强化。结论:在肾细胞癌中,CD82可作为一种转移抑制因子,通过抑制TGF-β1/Smad信号通路在肾癌的转移中发挥调控作用。CD82可为肾癌转移机制的研究提供新的思路,有望成为肾癌患者治疗的一个新型靶点。
赵巧飞[5]（2016）在《生长激素长期刺激导致肝脏生长激素不敏感效应的研究》文中研究说明研究背景生长激素（growth hormone,GH）是一种分子量22124D,含191个氨基酸残基的单链多肽类激素,其由人第17号染色体q22-24节段的基因编码,由垂体前叶的促生长激素细胞合成、贮存与分泌,在人体呈脉冲式分泌。生长激素是人体重要的激素,其主要作用为促进儿童时期身高的增长。除可促进人体的生长与发育,促进骨骼钙质沉积外,还可调节脂肪与能量代谢,刺激免疫系统等,并能提高人体在应激状态下的血清葡萄糖与游离脂肪酸浓度。生长激素缺乏（growth hormone deficiency,GHD）可引起多种疾病,在儿童主要表现为发育障碍、身材矮小,在成人则表现为代谢紊乱、骨质疏松甚至心理障碍等。目前治疗生长激素缺乏的唯一方法为补充外源性生长激素。在应用基因重组技术人工合成生长激素——重组人生长激素（recombinant human growth hormone,rhGH）之前,用于临床治疗的生长激素是从人类尸体的垂体中提取的,因而产量极低,使用极其严格,且难以满足需求。直至1985年,垂体源性生长激素由于用药安全问题被禁止使用,重组人生长激素获得FDA批准用于治疗儿童生长激素缺乏,开始全面取代垂体源性生长激素。此后重组人生长激素的应用范围逐渐拓宽,不仅被用于治疗由于生长激素缺乏而造成的儿童生长发育障碍如身材矮小、阴茎发育不良、骨骼生长缓慢等,还被用于治疗成人生长激素缺乏造成的肌肉质量减轻、骨质疏松等,以及与生长激素缺乏无关的儿童生长发育障碍如特发性矮小、特纳综合征（Turner’s syndrome,TS）;另外由于重组人生长激素可以逆转许多严重分解状态下的营养与代谢障碍,尚被用于慢性肾衰、烧伤、重大外科手术、败血症以及HIV/AIDS的消耗状态等的辅助治疗。伴随着重组人生长激素在临床上的广泛使用,出现了各种药物不良反应,成为药物使用安全性的一个重要问题。其不良反应包括药物过敏,营养与代谢紊乱,促进肝纤维化,脊柱侧弯,白血病风险,胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）,心肺意外甚至猝死。而对于这种由于应用外源性生长激素而产生的诸多不良反应的分子机制,尚有许多我们并不清楚,故而,研究生长激素作用于细胞的分子机制或许可以帮助我们理解外源性生长激素应用导致的不良反应可能的原因,进而为解决这一问题提供帮助。生长激素促进机体生长发育的机制主要有2种,均起始于与靶细胞细胞膜上的生长激素受体（growth hormone receptor,GHR）的结合,进而激活不同的信号通路。其一为与GHR结合后激活MAPK/ERK信号通路,直接刺激软骨细胞的分裂增殖；另一机制则是与GHR结合后激活JAK-STAT信号通路,刺激胰岛素样生长因子1（Insulin-like growth factor 1,IGF-1）的合成。IGF-1对多种组织均有刺激生长的作用,可同时刺激软骨细胞和成骨细胞生长。此外,生长激素与GHR的结合还能激活RAS-RAF-ERK通路,PI3K通路等多个信号通路。肝脏是生长激素在人体最重要的靶器官,并且是IGF-1主要的合成场所,而生长激素在肝脏细胞作用的信号转导通路以JAK-STAT信号通路为主,故本研究选择以生长激素在肝脏内的JAK-STAT通路的信号转导为靶点,研究生长激素长期刺激对肝脏JAK-STAT信号通路的影响。肝细胞中JAK-STAT通路的信号转导开始于生长激素与生长激素受体二聚体的结合。生长激素的蛋白结构中有4个可与GHR结合的单环结构,GHR以二聚体形式与之结合后,GHR的胞内段接着与2分子Janus激酶2（Janus kinase2, JAK2）结合,结合于GHR的JAK2可激活自身与GHR的磷酸化,磷酸化的GHR又可激活JAK2的磷酸化,两者形成交叉磷酸化,与生长激素一起,三者结合形成GH-GHR-JAK2多聚体,该多聚体可为下游的信号分子提供结合位点。信号转导及转录激活因子（signal transducers and activators of transcription, STATs）家族中的STAT1、STAT3和STAT5均可在JAK-STAT通路中被激活,但STAT5被认为是其中关键的信号分子。[18]STAT5有两个同源异构体——STAT5a和STAT5b,分别由鼠11号染色体和人17号染色体的一对等位基因编码。[19]GH-GHR-JAK2多聚体形成后,STAT5即与多聚体的信号分子结合位点结合,被磷酸化激活形成P-STAT5,随后P-STAT5聚合形成二聚体转入细胞核,结合于DNA上特定的反应元件（常为一个反向重复的TTCN3GAA序列）,调控靶基因如SOCS-2 （Suppressor of cytokine signaling 2）及IGF-1基因的转录。本课题选择同时从细胞水平和在体水平研究长期应用外源性生长激素对肝脏JAK-STAT信号通路的影响。[研究目的]生长激素在人体最重要的靶器官是肝脏,其在肝脏中主要的信号转导通路是JAK-STAT通路,而STAT5是该信号通路最主要的效应信号因子,本研究将同时从细胞水平与在体水平,检测生长激素长期刺激下肝脏STAT5磷酸化水平的变化,进而探究生长激素长期刺激对肝脏JAK-STAT信号通路的影响。[研究方法]1.细胞实验部分：本课题选择人肝癌细胞系Hep G2,以含10%（体积分数）胎牛血清的DMEM高糖培养基于37℃恒温CO2培养箱中培养。1.1 Hep G2对数生长期细胞均匀传代至12孔细胞培养板的8个孔,以含10%胎牛血清的DMEM培养基培养,待细胞密度增长至90%左右时将培养基换为不含血清的DMEM进行9小时血清饥饿,然后将细胞分为4组：Omin rhGH组,1Omin rhGH组,30min rhGH组与50min rhGH组,每组2孔。按分组情况予各组工作浓度3000ng/ml的重组人生长激素分别刺激50分钟、30分钟、10分钟、0分钟,每组添加刺激时其余各组予等体积无血清DMEM。刺激结束后以RIPA裂解液冰上裂解细胞,提取细胞总蛋白检测P-STAT5水平。1.212孔细胞培养板中放置清洁光滑的无菌盖玻片,HepG2对数生长期细胞均匀传代接种6个孔,控制细胞密度在30%左右,以含10%胎牛血清的DMEM培养基培养,待细胞贴壁牢固后立即将培养基换为不含血清的DMEM进行9小时血清饥饿,然后将细胞分为3组：Omin rhGH组,20min rhGH组,60min rhGH组,每组2孔。按分组情况予各组工作浓度3000ng/ml的重组人生长激素分别刺激60分钟、20分钟、0分钟,每组添加刺激时其余各组予等体积无血清DMEM。刺激结束后常温下移出细胞玻片,以4%多聚甲醛固定后检测P-STAT5水平。1.3 Hep G2对数生长期细胞均匀传代至12孔细胞培养板的4个孔,以含10%胎牛血清的DMEM培养基培养,控制细胞牢固贴壁时细胞密度在40-50%左右,之后将培养基换为含2%胎牛血清的DMEM,并将细胞分为生长激素长期刺激组与对照组,每组2孔。GH长期刺激组每日予工作浓度3000ng/ml的重组人生长激素刺激共3天,对照组每日予等体积无血清DMEM,控制末次添加刺激后24小时细胞密度增长至90%左右,之后将培养基换为不含血清的DMEM进行9小时血清饥饿,最后再予每组添加一次单剂量重组人生长激素（工作浓度3000ng/ml）作为阈上刺激,刺激30分钟后将细胞置于冰上以RIPA裂解液裂解,提取细胞总蛋白检测P-STAT5水平。2.动物实验部分：本课题选择6-8周龄的健康BALB/c雄性小鼠12只随机分为生长激素长期刺激组与对照组,每组6只。GH长期刺激组按1ug/g体重/次的剂量予每日1次腹腔注射重组人生长激素,对照组注射等体积生理盐水,共3周。末次注射后16小时于次日上午8：00处死。处死前30分钟每组随机选出3只予腹腔注射1次单剂量重组人生长激素（1ug/g体重）,其余6只注射等体积生理盐水。12只小鼠最终分为4组：对照组,GH单剂量刺激组,GH长期刺激组,GH长期+单剂量刺激组。全部刺激完成后,所有小鼠以水合氯醛充分麻醉,迅速摘取小鼠肝脏存于液氮中,之后移至-80℃超低温冰箱保存备用。冰上研磨小鼠肝脏组织,以RIPA裂解液冰上裂解细胞,提取组织蛋白检测P-STAT5水平。实验过程中,确保每日腹腔注射的时间一致,小鼠处死的时间点相同。每次注射两组交叉进行。3.蛋白信号分子的测定3.1实验1.1与实验1.3中提取的Hep G2细胞总蛋白,及实验2中提取的小鼠肝脏组织蛋白,应用蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测P-STAT5水平。3.2 Hep G2细胞爬片,应用细胞免疫荧光法（Immunofluorescence）染色后于荧光显微镜下观察P-STAT5蛋白信号的荧光强度,检测P-STAT5水平。4.统计分析全部实验数据采用WPS Excel 2015记录,并使用SPSS 20.0进行统计学分析。实验结果以“算术平均值±标准差（arithmetic mean±standard deviation, M±SD） "表示。两组间比较采用两独立样本t检验（Independent Samples T Test）或Satterthwaite近似t检验（满足或不满足方差齐性）。以P值<0.05为存在显着性差异,有统计学意义。[研究结果]1.体外研究（细胞培养试验）中生长激素长期刺激对HepG2细胞P-STAT5水平的影响1.1实验结果显示,50min rhGH组的HepG2细胞P-STAT5水平（灰度值：0.55±0.18）显着低于1Omin rhGH组与30min rhGH组的Hep G2细胞（灰度值分别为1.45±0.39,1.49±0.22）,（P值=0.023 vs. 1Omin rhGH组,P值=0.005 vs.30min rhGH组）；而1OminrhGH组与30min rhGH组的HepG2的P-STAT5水平则无显着差异（P值=0.879）。1.2实验结果显示,60min rhGH组的HepG2细胞的P-STAT5蛋白信号荧光强度明显弱于20min rhGH组的HepG2细胞。1.3实验结果显示,与对照组（灰度值：1.41±0.41）相比,GH长期刺激组Hep G2细胞的P-STAT5水平（灰度值：0.76±0.31）显着下降（P值=0.026）。2.体内研究（动物实验）中生长激素长期刺激对小鼠肝脏P-STAT5水平的影响2.1实验结果显示,与对照组（灰度值：1.47±0.45）相比,GH长期刺激组的小鼠肝脏P-STAT5水平（灰度值：0.42±0.06）显着降低。（P值=0.016）2.2实验结果显示,GH长期+单剂量刺激组小鼠肝脏P-STAT5水平（灰度值：2.05±0.33）显着高于GH长期刺激组的小鼠（灰度值：0.17±0.03）。（P值=0.01）2.3实验结果显示,GH长期+单剂量刺激组小鼠肝脏的P-STAT5水平（灰度值：1.29±0.34）显着低于GH单剂量刺激组（灰度值：3.48±0.88）。（P值=0.036）[研究结论]1.在细胞培养水平,生长激素长期刺激可抑制STAT5磷酸化,抑制JAK-STAT信号通路。2.在健康小鼠模型中,生长激素长期刺激可抑制STAT5磷酸化,抑制JAK-STAT信号通路,并可致小鼠肝脏对生长激素的敏感性降低。3.结合本研究前期实验结果推论,长期的生长激素刺激可能导致肝脏SOCS-3基因转录水平增高,并由此抑制了STAT5的磷酸化水平,从而抑制了JAK-STAT信号通路,降低肝脏对生长激素刺激的敏感性。
胡亚军[6]（2015）在《重组人生长激素对正畸诱导的炎症性牙根吸收的影响及机制的研究》文中研究说明正畸力移动牙齿的过程中,牙周组织受机械力的诱导发生改建,当破骨样细胞移除牙槽骨和透明样组织时,牙根表面的牙骨质和牙本质不可避免的也会发生破坏,导致牙根吸收。破骨细胞和成牙骨质细胞在牙根吸收过程中起着重要的作用：破骨细胞定植于牙根表面,直接引起了牙骨质或／和牙本质的吸收；成牙骨质细胞不仅能调控破骨细胞的分化和吸收功能,还能产生牙骨质,修复被吸收的牙根表面,从而影响牙根吸收的严重程度,促进牙根吸收的修复。因此,任何能改变这两种细胞功能状态的因素都可能影响正畸诱导的炎症性牙根吸收（OIIRR）。人生长激素（hGH）是人出生后促进生长的最重要的激素,具有广泛的生理功能,能影响几乎所有的组织类型和细胞。近年来,体外研究发现生长激素（GH）能促进破骨细胞的形成、分化及成熟；而动物实验和临床研究表明GH能促进前成牙骨质细胞分化为成熟的成牙骨质细胞,促进牙骨质的形成。鉴于GH对参与牙根吸收的两大类细胞——破骨细胞和成牙骨质细胞都能产生作用,那么GH也可能会影响OIIRR的严重程度。因此,本研究旨在探索重组人生长激素（rhGH）对重力诱导的牙根吸收的影响及可能的机制,为今后进一步的实验研究奠定基础；为正畸医生对正在接受rhGH治疗的患者正畸治疗计划的制定,牙根吸收风险的评估提供实验依据；为药物干预控制正畸诱导的牙根吸收提供新的方法和思路。研究内容分为以下四部分：第一部分 重组人生长激素对正畸牙移动和牙根吸收的影响目的：探讨rhGH对正畸牙移动和牙根吸收的影响。方法：50g力近中移动7周龄Wistar大鼠上颌右侧第一磨牙,GH组和对照组分别皮下注射rhGH （2mg/kg/d）和等量生理盐水。在加力第1、3、7、14天从两组中各取5只大鼠断头处死,取带磨牙的上颌骨进行Micro-CT扫描,并对其三维重建图像进行分析。结果：加力第1天和第3天,两组均未出现明显的牙根吸收；两组牙齿移动的距离亦无明显差别。加力第7天和第14天,与对照组相比,GH组牙齿移动明显加快,牙根吸收指数明显减小。结论：rhGH可能加快正畸牙移动,减轻牙根吸收的程度。短期的rhGH治疗可能作为正畸治疗的一种辅助方法,尤其适用于牙根容易发生吸收的患者。第二部分 重组人生长激素对牙根吸收过程中RANKL、OPG、IGF-I局部表达的影响目的：研究经rhGH治疗的大鼠RANKL、OPG、 IGF-I在牙根吸收过程中局部表达水平的变化。方法：50g力近中移动7周龄Wistar大鼠上颌右侧第一磨牙,GH组和对照组分别皮下注射rhGH （2mg/kg/d）和等量生理盐水。在加力第1、3、7、14天从两组中各取5只大鼠断头处死,取带磨牙的上颌骨,脱钙后进行TRAP和免疫组化染色,观察上颌第一磨牙远颊根近中TRAP阳性多核细胞、RANKL、OPG和IGF-I阳性牙周膜细胞。结果：加力第3天,与对照组相比,GH组TRAP阳性多核破骨细胞和RANKL阳性细胞明显增多,RANKL/OPG比值明显升高。加力第7天和第14天,与对照组相比,GH组OPG和IGF-I阳性牙周膜细胞明显增多,TRAP阳性多核破牙骨质细胞明显减少,RANKL/OPG比值明显降低。结论：rhGH能促进压力侧牙周膜细胞在OIIRR不同阶段表达RANKL、OPG 和 IGF-I; rhGH可能通过减小RANKL/OPG比值和促进IGF-I的表达来减少破牙骨质细胞,抑制牙根吸收,从而减轻牙根吸收的严重程度。第三部分 重组人生长激素对成牙骨质细胞增殖和分化的影响目的：体外研究rhGH对成牙骨质细胞增殖和分化的影响。方法：体外培养小鼠成牙骨质细胞OCCM-30,不同浓度（0、10、50、100 ng/m1）的rhGH分别孵育OCCM-30细胞24h和48h,采用MTT法检测不同浓度的rhGH在不同时间对OCCM-30细胞增殖活性的影响；采用Real-Time PCR法检测BSP、OCN、OPN、ALP、RANKL、OPG mRNA的表达。将OCCM-30细胞培养于含不同浓度rhGH的矿化培养基中7天,检测OCCM-30细胞ALP活力的变化。结果：10、50、100 ng/ml rhGH均能促进成牙骨质细胞的增殖,并且细胞增殖与rhGH的浓度和时间呈正相关。24h时不同浓度rhGH均能明显促进OCCM-30细胞BSP mRNA的表达；10ng/ml组OPN和ALP mRNA、50ng/ml 组 ALP mRNA、 100ng/m1组OCN和OPG mRNA水平明显升高,而50和100ng/ml组OPN mRNA水平明显降低。48h时50ng/ml组ALP mRNA、100ng/ml组BSP和ALP mRNA的水平明显低于对照组,10ng/ml组OCN、BSP和ALP mRNA及50和100ng/ml组OPG mRNA高于对照组。不同浓度rhGH组OCCM-30细胞IANKL mRNA的表达无明显差异。24h时50和100ng/ml组RANKL/OPG mRNA比值减小,而48h时不同浓度rhGH组RANKL/OPG比值无明显差异。与Ong/ml组相比,1Ong/ml组OCCM-30细胞ALP活力增高,而50和100ng/ml组ALP活力降低。结论：10、50、100ng/ml rhGH均能促进成牙骨质细胞的增殖。rhGH对成牙骨质细胞矿化相关指标的影响具有剂量和时间依赖性。50和10Ong/ml rhGH短期刺激可能通过减小成牙骨质细胞RANKL/OPG mRNA的比值来抑制成牙骨质细胞介导的破骨细胞的分化。第四部分 重组人生长激素对成牙骨质细胞促细胞分裂原活化蛋白激酶通路的影响目的：探讨rhGH对成牙骨质细胞ERK1/2、JNK/SAPK和p38MAPK信号通路的影响。方法：10Ong/ml rhGH孵育OCCM-30细胞,采用Western blot法检测0、5、10、15、30、60min 时 ERK1/2、JNK/SAPK、p38MAPK磷酸化水平的变化。应用ERK1/2通路抑制剂U0126阻断其作用,观察10mmin时100ng/ml rhGH 对 ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：在10Ong/ml rhGH刺激下,5min时OCCM-30细胞的ERK1/2磷酸化水平增加,10min达到峰值,15min明显降低,30min降至0min水平。ERK1/2通路抑制剂U0126存在时,1OOng/ml rhGH不能提高OCCM-30细胞ERK1/2磷酸化水平。100ng/mlrhGH不影响JNK/SAPK和p38 MAPK的磷酸化水平。结论：1OOng/ml rhGH可以激活OCCM-30细胞的ERK1/2通路,该作用能为ERK1/2通路抑制剂U0126所抑制；而相同浓度的rhGH不能激活JNK/SAPK和p38 MAPK通路。
沐雨,封革,曹鹏,蔡雪婷,李苏宜[7]（2014）在《重组人生长激素对GHR差异表达人胃癌细胞移植瘤生长的影响》文中认为目的运用小分子干扰GHR（si GHR）技术获取生长激素受体（GHR）基因差异表达的人胃癌MGC803细胞株,探讨rh GH干预GHR不同表达状态细胞株植入裸鼠体内的移植瘤生长情况及JAK2/STAT3通路关键节点基因表达变化。方法Western-Blot法鉴定亲本及转染后细胞株GHR表达状态,72只接种皮下移植瘤的裸鼠随机分为:对照组（生理盐水0.2ml/d）,低剂量rh GH组（1U/（kg·d））和高剂量rh GH组（3U/（kg·d））,连续给药21d,观察并记录裸鼠体质量和肿瘤体积,免疫组织化学法检测胃癌组织中VEGF蛋白表达,Western-Blot法测JAK2-STAT3通路节点蛋白变化。结果转染空载体细胞株GHR蛋白表达量与亲本细胞株差异不明显（P>0.05）,转染干扰载体株较亲本细胞株GHR蛋白下降57%。对于接种亲本及空载质粒转染的人胃癌细胞株MGC803的裸鼠,rh GH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大（P<0.05）,且rh GH组促增长效应显着（P<0.05）,3组间体重差异不明显（P>0.05）;VEGF蛋白表达较对照组升高,JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3含量增加;对于GHR表达下调的人胃癌细胞株MGC803的裸鼠,给药组体重大于对照组（P<0.05）,而3组之间肿瘤体积大小、VEGF蛋白表达水平及JAK2/STAT3通路重要节点蛋白含量比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 rh GH能促进GHR阳性表达的MGC803移植瘤生长,但对经si GHR技术抑制GHR基因表达的MGC803移植瘤未表现出促肿瘤生长效应,其机制可能与血清VEGF分泌及JAK2-STAT3信号转导通路节点基因功效有关。
郑茂恩,王可洲,金东庆,朱靖,周东顺,李临江[8]（2013）在《生长激素在肿瘤治疗方面的研究进展》文中指出生长激素在肿瘤治疗方面的应用是近年来肿瘤学研究的热点之一,它在肿瘤治疗中不但能改善患者的营养不良和负氮平衡、提高疗效和耐受性,而且也可能促进肿瘤细胞的生长,因此在选择治疗时必须相当谨慎。本文就生长激素对几种常见肿瘤的治疗做一叙述。
彭一峰[9]（2013）在《重组人生长激素联合化疗对Bel-7402肝癌细胞的体外影响》文中研究表明目的：探讨重组人生长激素（recombinant human growth hormone, rhGH）联合化疗药物阿霉素（adriamycin, ADM）对体外培养的Bel-7402肝癌细胞的影响。方法：该实验设计分组为对照组、不同浓度rhGH组、不同浓度rhGH+阿霉素（ADM）组及ADM组共8组。运用体外细胞培养技术,四甲基偶氮唑蓝比色（methyl thiazolyl terazolium, MTT）技术和流式细胞技术等研究方法,检测不同浓度的rhGH及不同浓度rhGH+ADM对体外培养的Bel-7402肝癌细胞的生长率、生长曲线、细胞周期及增殖指数（proliferation index,PI）等的影响。结果：48h后，MTT检测结果提示,与对照组比较,rhGH2及rhGH3组生长率明显升高（P<0.05）; ADM组明显抑制Bel-7402肝癌细胞生长（P<0.05）;与ADM组比较, rhGH+ADM各组抑制率明显降低（P<0.05）。从生长曲线图可以得出, rhGH各组较对照组明显升高,尤其rhGH2组升高明显, rhGH各组间、rhGH+ADM各组间变化不明显；与rhGH+ADM各组比较,ADM组明显降低。细胞周期结果显示,与对照组比较, rhGH2、rhGH3组的G2/M期比例和增值指数（PI）显着升高（P<0.05）, ADM组的G2/M期比例和PI显着降低（P<0.05）,与ADM组相比较,不同浓度rhGH+ADM组的G2/M期比例和PI明显升高（P<0.05）。结论：生长激素可促进体外培养的Bel-7402肝癌细胞生长;生长激素联合阿霉素治疗,可降低化疗药物的抗癌效果。
彭一峰,陈谦[10]（2013）在《生长激素应用于肝癌治疗的研究进展》文中研究说明生长激素在调节代谢、降低外科患者病死率方面疗效显着。然而生长激素能否安全地用于肝癌患者的治疗,仍存在争议。笔者复习相关文献,就近年关于生长激素治疗肝癌的实验与临床方面的研究进展进行综述。
二、重组人生长激素对肾癌细胞株作用的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重组人生长激素对肾癌细胞株作用的研究（论文提纲范文）
（1）rhGH-Fc中试条件优化及其主要指标检测方法建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 生长激素概述 |
| 1.2.1 生长激素 |
| 1.2.2 生长激素的发现 |
| 1.2.3 生长激素的结构 |
| 1.2.4 生长激素的生物学作用及作用机理 |
| 1.2.5 生长激素在临床上的应用 |
| 1.3 重组人生长激素-受体融合蛋白 |
| 1.3.1 rhGH-Fc的结构 |
| 1.3.2 Fc段免疫球蛋白的选择 |
| 1.3.3 基于FcRn(Neonatal Fc Receptor)的长效修饰 |
| 1.3.4 Fc融合蛋白类药物 |
| 1.4 哺乳动物表达系统 |
| 1.4.1 哺乳动物细胞规模化培养方法 |
| 1.4.2 哺乳动物细胞的培养工艺 |
| 1.4.3 哺乳动物细胞培养工艺优化方法 |
| 1.5 国内外研究进展及市场情况 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 1.7 创新点 |
| 第2章 融合蛋白rhGH-Fc中试培养条件优化 |
| 2.1 实验材料与设备 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 主要生化试剂 |
| 2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 rhGH-Fc表达体系CHO细胞活化 |
| 2.2.2 表达rhGH-Fc CHO细胞培养工艺优化 |
| 2.2.3 rhGH-Fc促生长活性测定 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 表达rhGH-Fc CHO细胞培养工艺优化结果 |
| 2.3.2 rhGH-Fc促生长活性测定结果 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 rhGH-Fc主要指标检测方法建立 |
| 3.1 实验材料与设备 |
| 3.1.1 所需试剂 |
| 3.1.2 所需设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 rhGH-Fc分子量检测 |
| 3.2.2 rhGH-Fc糖基化修饰检测 |
| 3.2.3 rhGH-Fc二硫键检测 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 rhGH-Fc分子量检测结果 |
| 3.3.2 糖基化修饰检测结果 |
| 3.3.3 二硫键检测结果 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）重组人生长激素及其突变体的表达、纯化和活性研究（论文提纲范文）
| 论文中缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 研究背景 |
| 1.1 人生长激素的结构与性质 |
| 1.1.1 人生长激素的结构 |
| 1.1.2 不同种属生长激素的同源性比较 |
| 1.1.3 人生长激素的相关基因分析 |
| 1.2 人生长激素的功能 |
| 1.3 生长激素的作用机理 |
| 1.4 重组人生长激素的研究进展 |
| 1.5 重组人生长激素的临床应用 |
| 1.6 本论文的立题依据 |
| 1.7 研究目的及技术路线 |
| 第二章 生长激素的基因筛查 |
| 2.1 实验材料和仪器 |
| 2.2 生长激素的基因筛查 |
| 2.3 部分患儿的血清检测 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第三章 重组人生长激素在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化和结构表征 |
| 3.1 实验材料和仪器 |
| 3.2 pET-22b(+)-ompA3-hGH表达载体的构建 |
| 3.3 重组表达宿主系统的构建与诱导表达 |
| 3.4 rhGH表达条件的优化 |
| 3.5 rhGH蛋白的结构鉴定 |
| 3.6 结果与分析 |
| 3.7 小结与讨论 |
| 第四章 生长激素突变体在大肠杆菌中的表达、纯化及结构表征 |
| 4.1 实验材料和仪器 |
| 4.2 克隆载体pMD-hGH-WT的构建 |
| 4.3 突变体克隆载体pMD-MU的构建 |
| 4.4 各突变体分泌表达载体的构建 |
| 4.5 生长激素突变体在Transetta(DE3)中的表达与纯化 |
| 4.6 生长激素突变体的结构鉴定 |
| 4.7 实验结果与分析 |
| 4.8 小结与讨论 |
| 第五章 重组人生长激素及其突变体的活性研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 重组人生长激素及其突变体的细胞活性初步研究 |
| 5.3 重组人生长激素及其突变体对斑马鱼血管的活性研究 |
| 5.4 小结与讨论 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 6.3 不足之处 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间论文发表和专利申请情况 |
| 致谢 |
（3）生长激素受体、胰岛素样生长因子-1受体、表皮生长因子受体在肾透明细胞癌中的表达及其意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）四跨膜蛋白CD82/KAI1通过调控TGF-β1/Smad通路抑制肾癌迁移侵袭的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 分析与讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）生长激素长期刺激导致肝脏生长激素不敏感效应的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 一、细胞实验部分 |
| 1. 实验细胞株 |
| 2. 主要实验试剂 |
| 3. 实验中使用的抗体 |
| 4. 主要溶液的配制 |
| 5. 主要仪器、设备和器材 |
| 6. 分组干预方案 |
| 7. 提取细胞总蛋白 |
| 8. 检测样品蛋白浓度 |
| 9. Western blot操作步骤 |
| 10. 免疫荧光染色步骤 |
| 11. 统计学分析 |
| 二、动物实验部分 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 主要实验试剂 |
| 3. 试验中使用的抗体 |
| 4. 主要溶液的配制 |
| 5. 主要器材、仪器和设备 |
| 6. 分组干预方案 |
| 7. 检测样品蛋白浓度 |
| 8. Western blot操作步骤 |
| 9. 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 一、细胞实验部分 |
| 二、动物实验部分 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 小结 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 在读期间已经发表和将要发表的论文 |
| 致谢 |
（6）重组人生长激素对正畸诱导的炎症性牙根吸收的影响及机制的研究（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 综述 |
| 第一部分 重组人生长激素对正畸牙移动和牙根吸收的影响 |
| 1 材料和旅方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 总结 |
| 附图 |
| 第二部分 重组人生长激素对牙根吸收过程中RANKL,OPG,IGF-I局部表达的影响 |
| 1 材料和旅 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 总结 |
| 附图 |
| 第三部分 重组人生长激素对成牙骨质细胞增殖和分化的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 总结 |
| 附图 |
| 第四部分 重组人生长激素对成牙骨质细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 总结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（7）重组人生长激素对GHR差异表达人胃癌细胞移植瘤生长的影响（论文提纲范文）
| 1 材料方法 |
| 1.1 细胞株与实验动物 |
| 1.2主要药物和试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 细胞培养及转染 |
| 1.3.2 胃癌细胞GHR表达的检测 |
| 1.3.3 皮下移植瘤模型的建立 |
| 1.3.4 实验分组与观察指标 |
| 1.3.5 免疫组化检测胃癌组织中VEGF蛋白表达 |
| 1.3.6 Western-Blot法测定JAK2/STAT3通路关键蛋白 |
| 1.3.7 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 亲本及转染后各组细胞株 |
| 2.2 肿瘤体积和裸鼠体质量变化 |
| 2.3 肿瘤组织JAK2/STAT3蛋白表达检测 |
| 3 讨论 |
（9）重组人生长激素联合化疗对Bel-7402肝癌细胞的体外影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂及仪器 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 细胞培养 |
| 1.4 MTT 法检测肝癌细胞活性 |
| 1.5 流式细胞仪测定 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞生长率及抑制率 |
| 2.2 细胞生长曲线 |
| 2.3 细胞周期分析及增值指数（PI） |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（10）生长激素应用于肝癌治疗的研究进展（论文提纲范文）
| 1 GH对肝癌的影响体外研究 |
| 2 GH应用于肝癌切除术后 |
| 3 GH肝癌移植瘤的影响 |
| 4 GH联合化疗治疗肝癌 |
四、重组人生长激素对肾癌细胞株作用的研究（论文参考文献）
- [1]rhGH-Fc中试条件优化及其主要指标检测方法建立[D]. 张凯宁. 长春理工大学, 2021(02)
- [2]重组人生长激素及其突变体的表达、纯化和活性研究[D]. 周珍如. 暨南大学, 2020(03)
- [3]生长激素受体、胰岛素样生长因子-1受体、表皮生长因子受体在肾透明细胞癌中的表达及其意义[D]. 谢传昊. 承德医学院, 2019(02)
- [4]四跨膜蛋白CD82/KAI1通过调控TGF-β1/Smad通路抑制肾癌迁移侵袭的研究[D]. 朱俊栋. 南京医科大学, 2018(01)
- [5]生长激素长期刺激导致肝脏生长激素不敏感效应的研究[D]. 赵巧飞. 南方医科大学, 2016(02)
- [6]重组人生长激素对正畸诱导的炎症性牙根吸收的影响及机制的研究[D]. 胡亚军. 武汉大学, 2015(07)
- [7]重组人生长激素对GHR差异表达人胃癌细胞移植瘤生长的影响[J]. 沐雨,封革,曹鹏,蔡雪婷,李苏宜. 肿瘤代谢与营养电子杂志, 2014(02)
- [8]生长激素在肿瘤治疗方面的研究进展[J]. 郑茂恩,王可洲,金东庆,朱靖,周东顺,李临江. 现代肿瘤医学, 2013(04)
- [9]重组人生长激素联合化疗对Bel-7402肝癌细胞的体外影响[D]. 彭一峰. 桂林医学院, 2013(03)
- [10]生长激素应用于肝癌治疗的研究进展[J]. 彭一峰,陈谦. 中国普通外科杂志, 2013(01)